荧光淬灭是什么?
荧光淬灭指荧光分子由于和其它分子发生作用而出现的光度降低、发光时间缩短乃至停止发光。
激发态反应、共振能量转移、形成非荧光性的络合物、分子碰撞、pH变化、温度变化、压力变化等各式各样的原因都可能引起荧光淬灭[1]。激发光的长时间照射是荧光淬灭的常见原因:荧光的产生需要激发光的照射,但这会促进激发态分子与其它分子相互作用、引起碰撞,进而导致荧光淬灭。
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荧光淬灭是什么?
荧光淬灭指荧光分子由于和其它分子发生作用而出现的光度降低、发光时间缩短乃至停止发光。
激发态反应、共振能量转移、形成非荧光性的络合物、分子碰撞、pH变化、温度变化、压力变化等各式各样的原因都可能引起荧光淬灭[1]。激发光的长时间照射是荧光淬灭的常见原因:荧光的产生需要激发光的照射,但这会促进激发态分子与其它分子相互作用、引起碰撞,进而导致荧光淬灭。
荧光的抗淬灭
标记样品的荧光淬灭是在荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察时遇到的主要问题。由于激光扫描共聚焦显微镜具有更强的功率和聚焦更准的光束,与普通荧光显微镜相比,标本的光漂白作用更为明显,荧光素的荧光可在连续观察过程中逐渐减弱或消失。
因此,应考虑使用抗荧光淬灭剂(抗荧光衰减剂)。常用抗荧光淬灭剂有P-苯二胺(Para-phenylene diamine,PPD)、n-丙基没食子酸盐(propyl gallate,NPG)、1,4-二偶氮双环[2,2,2)-辛烷(1,4-diazobicyelo(2,2,2)-octane,DABCO)等。其中p-苯二胺是有效的抗淬灭剂,但由于对光和热均有较强的敏感性,且具有毒性,因而限制了在体内的应用。
理想的PPD抗淬灭剂混合液配方是:9份甘油、1份PBS和浓度在2~7retool/L之间的PPl),pH为8.5~9.0。n-丙基没食子酸盐无毒性,对光和热稳定,但抗荧光漂白的效果不如PPl),可用于体内研究。推荐浓度为3~9retool/L,用甘油配制效果较好。l,4-二偶氮双环C2,2,2)-辛烷是一种稳定的非离子性抗淬灭剂,价格便宜且易使用,可用于体内研究。此外,还有其他的抗荧光淬灭方法也能使活性细胞或非活性标本荧光强度得到增强,如使用中密度滤片、采用高数值孔径物镜和相对较低的放大倍数等。
荧光聚合物
荧光聚合物,指在光照「能发出荧光的聚合物。炙光是分子受到光激发后,电子跃迁到高能态,当电子直接从高能级单线态返回到基态时能够以辐肘方式发出荧光,荧光的波长一般比激发光要长一些,作为分子振动能量损失。
聚合物的荧光强度与分子的光吸收度和光子效率有关,荧光颜色与分子结构和吸收波长有关。大多数芳香烃的荧光量的子效率较高,光吸收度大,吸收波长多在近紫外或者在可见区。含有上述结构的聚合物多为荧光聚合物。在荧光聚合物中含有起激发态淬灭作用的杂质时,荧光强度下降:荧丧聚合物在钦学分子、交通显示装置中有应用。
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往往我们能接触到的几乎是人肉眼难以看到的粉末或者是烟雾,一般物理化学办法去检查不能有效对于物品样品进行分析判断,目前,只能采用“离子迁移光谱”法来识别各种物质。其探测的基本原理是基于以下一些事实:
1.很多化学物质会散发出蒸气或颗粒,这些蒸气或颗粒会被它们与之接触的材料(衣服、行李、皮肤、容器、纸张等等)表面吸附或粘附。
2.这些痕量物质可通过真空吸附的方式或通过擦拭表面的方式收集起来。
3.这些化学物质即使是数量很少的残留物也可通过加热的办法从其颗粒上解吸下来(将它们变成蒸气)。
4.气化后的物质可被离子化(转化成带电的分子)。
5.在电场中,离子将漂向电场的某一极,其漂流的速度取决于离子的结构和大小。在有效控制电场强度的情况下,每种离子都有一个特定的移动速度,其速度象人的指纹一样,可用来识别产生每种离子的原始物质。
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