基因枪转化法
气动式基因枪中具有代表性的是PDS-1000/He,利用由不同厚度的聚苯四甲酰亚1胺膜制成的可裂圆片来调控氦气压力。当氦气压力达到可裂圆片的临界承受压力时,可裂圆片破1裂并产生强烈的气流,使微弹载体携带微弹高速运动,遇到刚性的阻挡网,微弹载体被阻遏,而微弹利用惯性继续向前高速运动,轰击靶1细胞或组织,从而携带外源基因进入细胞内。基因枪法不再受到受体基因型
逆转录病毒滴度测定
基因枪转化法
气动式基因枪中具有代表性的是PDS-1000/He,利用由不同厚度的聚苯四甲酰亚1胺膜制成的可裂圆片来调控氦气压力。当氦气压力达到可裂圆片的临界承受压力时,可裂圆片破1裂并产生强烈的气流,使微弹载体携带微弹高速运动,遇到刚性的阻挡网,微弹载体被阻遏,而微弹利用惯性继续向前高速运动,轰击靶1细胞或组织,从而携带外源基因进入细胞内。基因枪法不再受到受体基因型的限制,又能避开原生质体再生的障碍,从而使植物的遗传转化翻开了新的一页。
基因枪转化法在植物遗传转化中的应用:应用基因枪法转化zui早的是Klein等人在1987年将携带有细菌氯霉1素乙酰转移酶(cat)基因的烟1草花叶病毒的RNA导入洋葱的表皮细胞,使此基因得到表达。后来,随着对物理参数(如金属粒子的理化特性、DNA与金属粒子的结合和靶组织特性等)、环境条件(如受体植株、外植体和靶组织所适宜的温度、湿度和光照等)和生物因子(如外植体及其轰击前后的培养条件等)等的技术优化,不断完善的基因枪转化技术能实现对许多受体材料的转化,包括原生质体、悬浮细胞系、愈伤组织、外植体(幼穗、幼胚或成熟胚),甚至可以直接轰击转化花粉。
电1击法
电1击法基本原理是电脉冲使细胞膜产生可逆性的“微孔”,外源DNA可通过这些微孔进入受体细胞原生质体内。
1985年Fromm等用electric shock法将pat基因导入了玉米原生质体,得到了该基因稳定表达的愈伤组织。随着玉米原生质体再生技术的研究取得进展,1988年Rhodes等用electric shock法转化玉米原生质体,初步获得了完整的转0基因植株。electric shock法还可以对幼胚、愈伤组织和胚性悬浮细胞系进行遗传转化。1992年D’Hallum K等以玉米幼胚和愈伤组织为受体,用electric shock法导入neo基因,获得了可育的转0基因植株,并且neo基因能稳定地遗传给后代。1993年Sukhapinda等用electric shock法转化从玉米花粉愈伤组织分离的原生质体,将gusA和nptⅡ转入原生质体,获得单倍体转化植株。1994年Laursen等以果胶降解酶处理悬浮细胞系后,通过electric shock法导入bar基因,也获得了可育的转0基因玉米。
电1击法操作简单,不受宿主限制,在遗传转化技术研究的初期得到了较为广泛的应用,但是它的转化效率较低,而且对有壁细胞或组织的转化效果较差。
腺病毒传播特点
宿主范围广对人致病性低,腺病毒载体系统可广泛用于人类及非人类蛋白的表达。腺病毒可感1染一系列哺乳动物细胞,因此在大多哺乳动物细胞和组织中均可用来表达重组蛋白。特别需要指出的是:腺病毒具有嗜上皮细胞性,而人类的大多数的肿1瘤就是上皮细胞来源的。另外,腺病毒的copy基因和致病基因均已相当清楚,在人群中早已流行(70-80%成人体内都有腺病毒的中和抗1体存在)。人类感1野1生型腺病毒后仅产生轻微的自限性症状,且病毒唑cure有效。
(作者: 来源:)