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预染色蛋白质marker诚信企业「多图」

基于基因工程技术制备小分子特异性antibody 通过大量的实验发现,小分子的偶联物并不是不能产生特异性针对小分子的抗1体,而是效价过低,不满足制备多克1隆抗1体和单克1隆抗1体的需要,但是基因工程手段为制备该类型小分子特异性antibody提供了新的思路。该技术的核心在于制备antibody的基因文库,通过噬菌体展示技术、核糖体展示技术等获取antibody的目的基
预染色蛋白质marker








基于基因工程技术制备小分子特异性antibody

通过大量的实验发现,小分子的偶联物并不是不能产生特异性针对小分子的抗1体,而是效价过低,不满足制备多克1隆抗1体和单克1隆抗1体的需要,但是基因工程手段为制备该类型小分子特异性antibody提供了新的思路。该技术的核心在于制备antibody的基因文库,通过噬菌体展示技术、核糖体展示技术等获取antibody的目的基因,再利用蛋白表达系统制备重组antibody或者改造antibody,以获取针对小分子的特异性antibody。目前随着antibody基因测序信息的公布和完善,为人工设计antibody提供了基础,这也会以后小分子特异性antibody的制备提供了新的途径。





PCR产物的回收(胶回收试剂盒)

1.胶回收的目的(1)去除非特异性扩增的产物(2)去除多余的底物(3)去除多余的Taq酶(4)得到目的片段

2.胶回收的过程(1)切胶:紫外下切胶,称重。之后用枪头将胶块捣碎。切胶的刀片建议选用一次性刀片,实验台等也尽可能用乙醇擦拭干净。可通过空EP管与装胶EP管质量的差值计算胶的质量。注意切胶时尽可能避免切到条带外的凝胶,且避免紫外时间过长。别忘记胶条有厚度,前后多余的部分也尽量切除。(2)溶胶:每1 mg胶加入1 μL膜结合液(MB),按比例1:1加入MB,55℃水浴溶解。每1~2 min震荡混匀,待溶解后至少在水浴中保持1~2 min,保证胶块完全溶解。在电泳过程中,DNA会与大分子的多糖紧密结合,凝胶的种类和质量不同,DNA与之结合力也不同,只有凝胶充分溶解DNA才能充分释放。否则,凝胶将与DNA一起沉淀下来,洗脱后将影响回收结果的纯度。(3)结合:将溶胶转移至纯化柱内,12000 rpm离心1 min,倒掉收集管中的废液,将纯化柱重新插回收集管中。胶块完全溶解后建议将胶液温度降至室温再上柱,因为纯化柱在温度较高时结合DNA的能力较弱。





适用于PCR研究的提取法:

1 田间剪取植株新鲜叶片5-10mg(约2cm长)左右,新鲜叶片放于1 5ml离心管中,存于冰盒中,根据样品号贴上相应的标签。

2 用剪刀将叶片组织剪细(约0 5cm长)放在点穴式研板中。

3 加入400μlDNA提取缓冲液,用玻棒将叶组织研细,直到液体变成深绿色即可。

4 再加400μlDNA提取缓冲液,混合均匀,转入一新的1 5ml离心管(贴上相应的编号)。

5 加400μl氯1仿,混合均匀后,2400×g离心30s,将上清液转入一支新的1 5ml离心管(贴上相应的编号)。

6 加800μl无水乙醇,混匀,2400×g离心3min。弃上清。

7 70%乙醇冲洗,风干。

8 用50μlTE缓冲液溶解,存于-20℃。

9 取1μl用于PCR分析。





为什么用无水乙醇沉淀DNA

  用无水乙醇沉淀DNA,这是实验中较常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶, 乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。

  DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合,其乙醇的zui终含量占67%左右。 因而也可改用95%乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。

  但是加95%的乙醇使总体积增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大, 尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙酵, 后面的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙1醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15-30分钟即可。






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