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加酶标:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

哺乳动物细胞溶质中的SOD呈绿色,并且由两种亚单位构成,一种含有铜,另一种含有锌(Cu/Zn-SOD)。线粒体和细菌SOD为红紫色并含有锰(Mn-SOD)。E.coli含有Mn-SOD和Fe-SOD。为了测定SOD的活性,研究人员尝试了许多间接的或者直接的方法,其中,NBT的间接法为常用,因为它很方便。但是,NBT法有几个缺点,例如生成的染料水溶性差,而且会和氧化酶的还原型发生反应。虽然cytochrome C法也常被用来做SOD检测,但它和超氧化物反应过于剧烈,不能测定低水平的SOD。
如从培养的植物细胞中提取基因组DNA,请离心收集2×103~1×107的培养植物细胞,加入150 μl水充分悬浮细胞后移入研钵中,加入液氮后、用力研磨至粉末状。注)样品研磨应充分,否则将会严重影响基因组DNA的收率。② 将研钵移至65℃水浴,当样品粉末刚开始融化时,向研钵中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1,用力碾磨30秒。③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆移至Collection Tube中。如匀浆体积不足650 μl,请补充Solution A至650 μl。65℃保温15分钟。注)处理富含纤维的根/茎等植物材料或富含淀粉、蛋白质的种子等时,可延长水浴时间至60分钟。

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