细胞增殖是生活1细胞的重要生理功能之一,是生物体的重要生命特征。细胞的增殖是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。
越来越多的研究者们已经把目光集中到了细胞增殖检测,关于细胞增殖检测的方法也在不断更新。那么到目前为止,研究细胞增殖有哪些手段呢?
细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿1瘤medicine效果的基础实验手段。准确的检测细胞增殖方法是BrdU
酵母DNA提取
细胞增殖是生活1细胞的重要生理功能之一,是生物体的重要生命特征。细胞的增殖是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。
越来越多的研究者们已经把目光集中到了细胞增殖检测,关于细胞增殖检测的方法也在不断更新。那么到目前为止,研究细胞增殖有哪些手段呢?
细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿1瘤medicine效果的基础实验手段。准确的检测细胞增殖方法是BrdU法。而EdU法检测试剂盒是Brdu方法的革命性突破。EdU试剂盒是一种嘧1啶类似物,可以在DNA合成期整合入DNA双链。通过以上原理图的对比,大家不难发现,EdU法检测细胞增殖,无须抗1体,无变性步骤,保持细胞形态和DNA完整性,是一种简单,可靠,省事的方法。
总RNA的抽提方法:
目前常用的方法是用异硫qing酸胍苯1酚抽提法。
提取步骤:
先用液氮研磨材料,匀浆,加入Trizol试剂,进一步破碎细胞并溶解细胞成分。然后加入氯1仿抽提,离心,分离水相和有机相,收集含有RNA的水相,通过异丙1醇沉淀,获得比较纯的总RNA,用于下一步mRNA的纯化。也可将含有RNA样品的细胞破碎液通过硅胶膜纯化柱纯化。
RNA浓度和纯度判断:
OD260为1时相当于浓度为50 ug/mL;
OD260/0D280值在1.8~ 2.0之间,表示纯度较好;
0D260/OD280值1.8,样品有蛋白质或酚污染;
0D260/0D280值大于2.0,提取的RNA可能有降解;
电泳后如果rRNA大小完整,而且28S rRNA和18SrRNA亮度接近2:1、mRNA分布均匀,则认为RNA。
适用于PCR研究的提取法:
1 田间剪取植株新鲜叶片5-10mg(约2cm长)左右,新鲜叶片放于1 5ml离心管中,存于冰盒中,根据样品号贴上相应的标签。
2 用剪刀将叶片组织剪细(约0 5cm长)放在点穴式研板中。
3 加入400μlDNA提取缓冲液,用玻棒将叶组织研细,直到液体变成深绿色即可。
4 再加400μlDNA提取缓冲液,混合均匀,转入一新的1 5ml离心管(贴上相应的编号)。
5 加400μl氯1仿,混合均匀后,2400×g离心30s,将上清液转入一支新的1 5ml离心管(贴上相应的编号)。
6 加800μl无水乙醇,混匀,2400×g离心3min。弃上清。
7 70%乙醇冲洗,风干。
8 用50μlTE缓冲液溶解,存于-20℃。
9 取1μl用于PCR分析。
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