加酶标:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以
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加酶标:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
主要设备编辑试剂(1) 包被缓冲液(PH9.60.05M碳酸盐缓冲液):Na2CO3 1.59克NaHCO3 2.93克加蒸馏水至1000ml(2) 洗涤缓冲液(PH7.4PBS):0.15MKH2PO4 0.2克Na2HPO4·12H2O 2.9克NaCl 8.0克KCl 0.2克Tween-20 0.05% 0.5ml加蒸馏水至1000ml(3) 稀释液:牛白蛋白(BSA) 0.1克加洗涤缓冲液至100ml或以羊、兔等与洗涤液配成5~10%使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。8. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。9. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。10. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。11. 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。12. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

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