分子实验介绍——荧光检测
细胞荧光染色是以荧光物质标记而进行抗原定位的技术。在细胞中,通过特定的标记,可以检测目的蛋白表达量和表达定位。是细胞中的可直观观察细胞内蛋白定位和表达的实验方法。
实验流程:细胞固定-细胞膜破膜-蛋白封闭-目的蛋白结合-荧光二抗结合-DAPI染色-荧光显微镜拍照或激光共聚焦显微镜拍照。
结果示例:
细胞荧光染
通
实时定量pcr
分子实验介绍——荧光检测
细胞荧光染色是以荧光物质标记而进行抗原定位的技术。在细胞中,通过特定的标记,可以检测目的蛋白表达量和表达定位。是细胞中的可直观观察细胞内蛋白定位和表达的实验方法。
实验流程:细胞固定-细胞膜破膜-蛋白封闭-目的蛋白结合-荧光二抗结合-DAPI染色-荧光显微镜拍照或激光共聚焦显微镜拍照。
结果示例:
细胞荧光染
通过观察细胞中蛋白的荧光强度和定位分析该蛋白的表达变化。
LncRNA芯片
Long non-coding RNAs(lncRNAs)是一类转录本长度超过200 nt的功能性非编码RNA分子。本方法采用两步法:推测试验:样品稀释后,选择三个稀释度,每个稀释度接种三管LST肉汤。目前的研究已证实,lncRNA参与X染色体沉默,基因组印记以及染色质修饰,转录ji活,转录干扰,核内运输等多种重要调控过程。随着对lncRNA在哺乳动物进化及人类疾病发生和发展中作用的日益关注,lncRNA调控机制已成为当前遗传学研究的热点问题。
筛选出差异表达的lncRNA是研究其在人类疾病发生中所扮演角色的基础。富衡生物为用户提供高通量的lncRNA芯片进行lncRNA表达谱分析,该芯片基于Agilent的SurePrint技术生产,实验。
技术优势
信息覆盖广泛:覆盖了多个quan威lncRNA数据库发布的数据;提供人,小鼠,大鼠的lncRNA检测。
lncRNA和mRNA同时检测:芯片上包含有的lncRNA和新的mRNA序列检测探针。一次芯片实验可同时对lncRNA和mRNA进行分析。
平台成熟可靠:采用Agilent原位喷墨合成技术,了高检测灵敏度和特异性。
数据分析:提供lncRNA和mRNA表达谱差异分析和功能分析,以及二者的关联分析。
基因组甲l基化水平(Methyl ati on Content)的分析:
1.高l效液相色谱(Hi gh-performanceLi qui dChromatography, HPLC)HPLC是- -种比较传统的方法,是根据DNA或蛋白分子量和构象的不同而使其加以分离。由于在动态相和静态相下分子的光吸收度并不相同而加以定量。随着系统的压强的增加,其分辨率增l高。故而能够定量测定基因组整体水平DNA甲l基化水平。若miRNA与mRNA的结合位点不配对,则抑制mRNA的翻译。该方法由Ruo等1980年首l次报道。过程是将DNA样品先经盐酸或氢l氟酸水解成碱基,水解产物通过色谱柱,结果与标准品比较,用紫外光测定吸收峰值及其量,计算5 mC/(5mC+5C)的积分面积就得到基因组整体的甲l基化水平。这是一种检测DNA甲l基化水平的标准方法。
2.高l效毛细管电泳法(Hi gh-per formance Capillary Electrophoresis, HPCE)这是一-种利用窄孔熔融石英毛细管来从复合物中分离不同化学组分的技术。其基础是在强电场下不同分子的由于其所带电荷,大小,结构以及疏水性等不同而相互分开。逆转录病毒构建及包装逆转录病毒(Retrovirus)是一类RNA病毒。用HIPCE方法处理DNA水解产物来确定5mC水平,简便,经济且敏感性高。
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