固相萃取柱的操作方法介绍
一、反相萃取柱操作
从极性基体中提取非极性的样品
1、活化:以3-5毫升去离子水(或缓冲液)淋洗萃取柱并保持萃取柱湿润
2、上样:以合适的流速使样品均匀通过萃取柱
3、清洗:以5毫升适当极性的溶剂洗脱吸附样品的萃取柱(常用的有纯水,缓冲液,水/溶剂混合液)
4、洗脱:将被测样品,用1-5毫升非极性溶剂分批洗脱至收集容
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固相萃取柱的操作方法介绍
一、反相萃取柱操作
从极性基体中提取非极性的样品
1、活化:以3-5毫升去离子水(或缓冲液)淋洗萃取柱并保持萃取柱湿润
2、上样:以合适的流速使样品均匀通过萃取柱
3、清洗:以5毫升适当极性的溶剂洗脱吸附样品的萃取柱(常用的有纯水,缓冲液,水/溶剂混合液)
4、洗脱:将被测样品,用1-5毫升非极性溶剂分批洗脱至收集容器
二、正相萃取柱操作
从非极性基体中提取极性的样品
1、活化:3-5毫升非极性溶剂淋洗萃取柱
2、清洗:以5毫升适当非极性的溶剂洗脱吸附样品的萃取柱
3、洗脱:将被测样品,用1-5毫升极性溶剂分批洗脱至收集容器
三、离子交换萃取柱
提取带电荷的样品
1、活化:以3-5毫升去离子水/或低离子强度的缓冲液淋洗萃取柱
2、上样:以较低的流速,使样品均匀通过萃取柱
3、清洗:5毫升去离子水/或低离子强度的缓冲液淋洗萃取柱
4、洗脱:将被测样品,用1-5毫升高离子强度的缓冲液洗脱至收集容器
固相萃取柱的填料
固相萃取填料通常是色谱吸附剂，大致可以分为三大类，分别是以硅胶、高聚物、无机材料为基质。
一类是以硅胶为基质，如：Waters Sep-Pak C18固相萃取小柱，硅胶极性很强，呈弱酸性,可被用于正相或反相两种分离模式：正相提取时，极性比硅胶弱，反相提取时非极性比C18 或 C8 的弱。对于类固醇有着较好的萃取效果通常用于非极性或弱极性化合物的萃取或极性杂质的去除。主要用于血样、尿样中药品及其代谢物、多肽脱盐、环境样品中的痕量有机化合物富集、饮料中的有机酸。
第二类是以高聚物为基质，如：聚乙烯-二乙烯苯等。高纯度、高交联度的乙烯-二乙烯基苯聚合物为固定相填装的萃取小柱具有高载样量，可耐受极端 pH 条件和不同的溶剂，对极性化合物具有优异的保留能力。可用作酸性的、中性的和碱性化合物的通用型吸附剂，通常用于反相条件下保留含有亲水基团的疏水性化合物如：酚类、硝基芳香类等。
第三类是以无机材料为主的，如：弗罗里硅藻土、氧化铝、石墨化碳等。弗罗里硅土是一种氧化镁复合的极性硅胶吸附剂，以此为基质的萃取小柱适合于从非极性基质中吸附极性化合物，如多多环芳烃、有机氯农残等；石墨化碳黑（CARB）萃取小柱, 以石墨化碳黑为填料，萃取过程非常迅速。且对化合物的吸附容量比硅胶大一倍有余，由于石墨化碳黑表面的正六元环结构，使其对平面分子有极强的亲和力，非常适用于很多有机物的萃取和净化，尤其适于分离或去除各类基质如水果、蔬菜中的色素、甾醇等物质；以氧化铝为基质的填料有酸、碱、中性三种类型，适用于酸性、碱性的、中性溶剂的分离萃取。
固相萃取柱该用什么溶剂进行活化、淋洗和洗脱
对于这个问题，简而言之，就是无法统一标准，必须根据样品的性质、溶剂背景等情况来进行选择。
一般来说，标准回答是:固相萃取柱该用什么溶剂进行活化、淋洗和洗脱，这没有统一的规定，请根据您分析所依据的、药典或者已经验证的方法来。
1、活化:固相萃取柱活化的目的有两个，一个目的是为了浸润填料、以便样品溶液能流过固相萃取柱；另一个目的是为了清洗固相萃取柱上面的干扰杂质以及溶剂残留。
2、上样:让样品溶液流过固相萃取柱，让填料吸附目标物质。一般流速不能太快，否则吸附不完全，会导致回收率低下。
3、淋洗:需要选择合适溶剂，既不会把吸附在固相萃取柱填料上面的目标产物洗掉，又能清洗掉一些干扰杂质，这个的选择也是根据既有方法来的，没有统一标准。
4、洗脱:选择合适的溶剂来把吸附在固相萃取柱填料上的目标物洗脱掉(大多数时候需要用试管来收集)，这个溶剂也是根据具体实验方法来定的，无法统一规定。
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