植物的遗传转化是以植物器1官、组织、细胞或原生质体作为受体,通过某种技术或途径转入外源基因,获得外源基因稳定表达的可育植株。遗传转化可以打破物种界限,有目的地实现物种之间或物种内部遗传物质的交流,为植物的遗传改良开辟了一条新的途径。
植物遗传转化方法就是通过特定的方式将外源基因导入到受体细胞内,使之发生定向的遗传变异。目前,已经建立了多种转化系统。对于大多数遗
腺病毒滴度测定
植物的遗传转化是以植物器1官、组织、细胞或原生质体作为受体,通过某种技术或途径转入外源基因,获得外源基因稳定表达的可育植株。遗传转化可以打破物种界限,有目的地实现物种之间或物种内部遗传物质的交流,为植物的遗传改良开辟了一条新的途径。
植物遗传转化方法就是通过特定的方式将外源基因导入到受体细胞内,使之发生定向的遗传变异。目前,已经建立了多种转化系统。对于大多数遗传转化系统而言,遗传转化方法是遗传转化系统的关键环节,决定着转化的成败及效率。用于植物的遗传转化方法有许多:农杆1菌介导法、基因枪法和PEG法等。
在转0基因植物中,用农杆1菌介导法获得的转0基因植物占80%,但大多集中在双子叶植物上。自从基因枪问世以后,单子叶植物中的禾谷类作物的遗传转化获得了迅速发展。农杆1菌介导法和基因枪法已成为目前用于遗传转化的主要方法。

农bacillus转化法
农bacillus包括引起植物冠瘿瘤的根癌农bacillus和引起发根病的发根农杆1菌。根癌农杆1菌和发根农bacillus有相似的遗传背景。在农bacillus介导的转化中,80%左右是由根癌农bacillus介导的,大约20%是由发根农bacillus介导的。这里主要介绍根癌农杆1菌介导的转化。
根癌农bacillusTi质粒上有一段转移DNA(T-DNA)和Vir区,在农bacillus侵染植物时,这段T-DNA可以插入到植物基因组中,使其携带的基因在植物中得以表达。Vir区共24个基因,它们表达的蛋白与T-DNA的加工和转移有关。
腺病毒是无包膜的线性双链DNA病毒,在自然界分布广泛,至少存在100种以上的血1清型。其基因组长约36kb,两端各有一个反向末端重复区(ITR),ITR内侧为病毒包装信号。基因组上分布着4个早期转录元(E1、E2、E3、E4)承担调节功能,以及一个晚期转录元负责结构蛋白的编码。早期基因E2产物是晚期基因表达的反式因子和copy必须因子,早期基因E1A、E1B产物还为E2等早期基因表达所必须。因此,E1区的缺失可造成病毒在copy阶段的流1产。E3为copy非必须区,其缺失则可以大大地扩大插入容量。腺病毒载体大多以5型(Ad5)、2型(Ad2)为基础,新增了55型(Ad55),很多研究机构在研究当中,55型将比5型流行以及应用更具广泛性。

腺病毒分离与鉴定
1.分离培养 标本应尽早从感1染部位采集。采集患者咽喉、眼分泌物,粪便和尿液等,加抗1生素处理过夜,离心取上清接种敏感细胞(293、Hep-2或HeLa细胞等),37℃孵育后可观察到典型CPE,即细胞变圆、团聚、有拉丝现象,较突出的表现是许多病变细胞聚在一起呈葡萄串状。
2.病毒鉴定 用荧光标记的抗六邻体抗1体与分离培养细胞作用来鉴定腺病毒,也可用血凝抑制(hemoagglutination inhibition,HI)试验或中和试验(neutralization test)检测属和组特异性抗原并鉴定病毒的血1清型。腺病毒可用Shell vial技术进行鉴定。病毒标本经抗1生素和离心处理,取上清接种于有细胞的Shell vial培养瓶,孵育1~2天,用特异性六邻体单克1隆抗1体对其抗原表位进行检测。也可用病1人鼻粘膜上皮脱落细胞直接染色检测病毒抗原。用DNA杂交或内切酶酶切等鉴定分离培养的病毒DNA;PCR可用于腺病毒感1染的诊断,引物设计主要根据腺病毒六邻体、VAI和VAII编码区序列,能检测所有血1清型,而且其敏感性很高,能检测某些patient潜在的腺病毒。用腺病毒41型BgIII-D片段作探针诊断腺病毒腹泻,其检出率可达80%。
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