保藏的目的、原理及常用的方法有哪些？
微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。
低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。
保藏方法大致可分为以下几种：
1．传代培养保藏法
又有斜面
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保藏的目的、原理及常用的方法有哪些？
微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。
低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。
保藏方法大致可分为以下几种：
1．传代培养保藏法
又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。
2．液体石蜡覆盖保藏法
是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起存活率，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。
3．载体保藏法
是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
4．寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。
5．冷冻保藏法
可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。
6．冷冻干燥保藏法
先使微生物在极低温度（-70℃左右）下冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。
低温生物菌种的控温方法
1.程序控温降温法，应用电子计算机程序控制降温装置，可以稳定连续降温，能很好地控制降温速率。
2.分段降温法：将菌体在不同温级的冰箱或液氮罐口分段降温冷却，或悬挂于冰的气雾中逐渐降温。一般采用二步控温，将安瓿管或塑料小管，先放-20℃至-40℃冰箱中1-2小时，然后取出放入液氮罐中冷冻。这样冷冻速率大约每分钟下降1-1.5℃。对耐低温的微生物、可以直接放入气相或液相氮中。
3.保藏
将安瓿管或塑料冻存管置于液氮罐中保藏。一般气相中温度为-150℃，液相中温度为-196℃。保藏周期一般10年以上。
4.复苏方法
从液氮罐中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置在38℃-40℃水浴中复苏并适当摇动。直到内部结冰全部溶解为止，一般约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养。
低温生物的滤纸保藏法
(1)将滤纸剪成0.5×1.2cm的小条，装入0.6×8cm的安瓿管中，每管1-2张，塞以棉塞，1.05kg/cm2>，121.3℃灭菌30分钟。
(2)将需要保存的，在适宜的斜面培养基上培养，使充分生长。
(3)取灭菌脱脂牛乳1-2ml滴加在灭菌培养皿或试管内，取数环菌苔在牛乳内混匀，制成浓悬液。
(4)用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内，使其吸饱，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。
(5)将安瓿管放入内有二磷作吸水剂的干燥器中，用真空泵抽气至干。
(6)将棉花塞入管内，用火焰按图Ⅶ-13熔封，保存于低温下。
(7)需要使用，复活培养时，可将安瓿管口在火焰上烧热，滴一滴冷水在烧热的部位，使玻璃破碎，再用镊子敲掉口端的玻璃，待安瓿管开启后，取出滤纸，放入液体培养基内，置温箱中培养。
细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏，前两者可保藏2年左右，有些丝状真菌甚至可保藏14-17年之久。此法较液氮、冷冻干燥法简便，不需要特殊设备。
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