DNA连接酶主要用于产生新的核酸分子组合，及在将其连接到载体上
这三个连续的步骤在连接酶的三个不同域进行，与双链DNA接触的各个域环绕DNA底物形成反应域。DNA连接酶主要用于产生新的核酸分子组合，以及在分子克1隆前将其连接到载体上。
用于分子克1隆的DNA连接酶是细菌来源或者噬菌体编码。所有真细菌，无论是嗜热或嗜温，包含一个单一的连接酶基因，编码NAD*-依赖
反转录酶
DNA连接酶主要用于产生新的核酸分子组合，及在将其连接到载体上
这三个连续的步骤在连接酶的三个不同域进行，与双链DNA接触的各个域环绕DNA底物形成反应域。DNA连接酶主要用于产生新的核酸分子组合，以及在分子克1隆前将其连接到载体上。
用于分子克1隆的DNA连接酶是细菌来源或者噬菌体编码。所有真细菌，无论是嗜热或嗜温，包含一个单一的连接酶基因，编码NAD*-依赖型的酶(Olivera and Lehman1967; Takahashi et al. 1984)。
在连接反应的第yi步中， 使用NAD的二磷酸作为磷酸1酐键和腺营基团转移到DNA连接酶赖氨酸残基的ε-氨基基团。腺苷酸残基然后转移到DNA底物的5-磷酰基末端，变得易于受到并列的3'羟基基团的亲核攻击。
这导致磷酸二酯键的形成，消去AMP,以及形成DNA链的共价连接。用于分子克1隆的DNA连接酶在连接非经典底物时能力有所不同，如平末端双链、DNA-RNA杂交体或单链DNA.这些以及其他的属性归纳于表5。分子克1隆中比较常用的催化体外连接的酶是T4噬菌体编码的DNA连接酶。
基因的分子手术是相当复杂的过程，其中zui重要的是连接酶
互补碱基之间的配对，形成双链。并在DNA连接酶的作用下，使同一DNA分子的两端连接成环状，或使两个分子连成一大的线状分子。不同限制性内切酶切割DNA产生的三种不同类型的末端。
基因的分子手术是相当复杂的过程，除了需要限制性内切酶外，还需要其他- -些工具酶包括连接酶、DNA 聚合酶、RNA聚合酶、核酸酶、末端修饰酶等，对DNA或RNA进行各种各样的修饰。其中zui重要的是连接酶。
碱性磷酸酶是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，即通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基，这类底物包括核酸、蛋白、生物1碱等。而该脱去磷酸基团的过程被称为去磷酸化或脱磷酸化。碱性磷酸酶是磷酸酶的一种，磷酸酶的作用与激酶的作用正相反，激酶是磷酸化酶，可以利用能量分子，如ATP，将磷酸基团加到对应底物分子上。碱性磷酸酶在碱性环境有zui大活力，对来源于细菌中的ALP来说，其zui适pH是8.0，而对来源于牛的ALP则是8.5。
当DNA聚合酶 III沿着滞后链模板移动时，由特异的引发酶催化合成的RNA引物即可以由DNA聚合酶 III所延伸，合成DNA。当合成的DNA链到达次合成的冈崎片段的位置时，滞后链模板及刚合成的冈崎片段从DNA聚合酶 III上释放出来。由于copy叉继续向前运动，便又产生了一段单链的滞后链模板，它重新环绕DNA聚合酶 III,通过DNA聚合酶III开始合成新的滞后链冈崎片段。通过这种机制，前导链的合成不会超过滞后链太多，这样引发体在DNA链上和DNA聚合酶 III以同一速度移动。在copy叉附近，形成了以DNA聚合酶 III二聚体、引发体和解旋酶构成的类似核糖体大小的以物理方式结合成的复合体，称为DNA copy体。copy体在DNA前导链模板和滞后链模板上移动时便合成了连续的DNA前导链，以及由许多冈崎片段组成的滞后链。当冈崎片段形成后，DNA聚合酶I通过其 5'→3'外切酶活性切除冈崎片段上的RNA引物，并利用后一个冈崎片段作为引物由 5'→3'合成DNA填补缺口。zui后由DNA连接酶将冈崎片段连接起来，形成完整的DNA滞后链。
（作者： 来源：）
