目前,传统的获得多基因转基yin植株的方法包括共转化,再转化W及杂交。但是运 些传统方法的缺点是共转化的两个或多个基因的转化效率是不可控的,每个基因在目标基因组的插入位置也是不一样的,而基因分离会导致不稳定的遗传后代。另外再转化W及杂 交都是耗时的过程。
而为了克服运些缺点,具有单个或者多个转录盒子的多基因载体应运而生并成功 应用于多个研究,但是运些多基因表达载体的应
分子伴侣蛋白
目前,传统的获得多基因转基yin植株的方法包括共转化,再转化W及杂交。但是运 些传统方法的缺点是共转化的两个或多个基因的转化效率是不可控的,每个基因在目标基因组的插入位置也是不一样的,而基因分离会导致不稳定的遗传后代。另外再转化W及杂 交都是耗时的过程。
而为了克服运些缺点,具有单个或者多个转录盒子的多基因载体应运而生并成功 应用于多个研究,但是运些多基因表达载体的应用没有得到广泛的推广应用。因为大部分 的方法需要亚克1隆W至于克1隆所耗时间拉长;没有标签或者报告基因与目标基因相连,运 样就导致蛋白或者基因的鉴定比较困难;另外,某些方法如采用同尾酶构建多基因载体的方法受限于可用的酶的数量不多运个问题。所W构建多基因载体需要根据研究目的而设计。
胰蛋白酶系自牛、羊或猪胰中提取的一种蛋白水解酶。药品标准规定按干燥品计算,每1mg 的效价不得少于2500单位。 由牛、羊、猪胰脏提取而得的一种肽链内切酶,只断裂赖氨酸或精氨酸的羧基参与形成的肽键。白色或米黄色结晶性粉末。溶于水,不溶于乙醇、甘油、氯1仿和乙1醚。分子量24 000,pI 10.5,zui适pH值7.8~8.5左右。pH值2~3是稳定的。pH值5以上易自溶失活。pH>9.0不可逆失活。Ca2+对酶活性有稳定作用;重金属离子、有机磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶抑制1剂对其活性有强烈抑制。临床用于消1炎,工业上用于皮革制造、生丝处理、食品加工等。

植物表达系统
植物能够表达来自动物、细菌、病毒以及植物本身的蛋白质易于大规模培养和生产,且在基因表达与修饰及安全性方面有特别的优势,因此利用植物生产外源蛋白质的研究展现了极其诱人的前景。多种抗1体、酶、激紊、血浆蛋白等都已通过基因工程的手段在植物的叶、茎、根、果实、种子以及植物细胞和器1官中得到表达,然而提取与纯化始终是大规模利用植物生产重组蛋白的主要障碍。Doloressa等据内质网和内质网信号肽在蛋白质合成中的作用,把3种重组蛋白,即嗜热细菌来源的木聚糖酶、水母的绿色荧光蛋白和Human placenta分泌的碱性磷酸酶(SEAP)定位到质外体中,通过根分泌和叶分泌途径获得表达,从而建立了两种新的重组蛋白表达系统——植物根分泌和叶分泌,简化了分离和纯化程序,为利用转基yin植物大规模生产重组蛋白提供了潜在的途径。虽然利用植物表达、生产外源性蛋白起步较晚,但已经能够利用植物生产多种食用以及工业用蛋白及酶制剂。
连接方法用约20种氨基酸作原料,在细胞质中的核糖体上,将氨基酸分子互相连接成肽链。一个氨基酸分子的氨基和另一个氨基酸分子的羧基,脱去一分子水而连接起来,这种结合方式叫做脱水缩合。通过缩合反应,在羧基和氨基之间形成的连接两个氨基酸分子的那个键叫做肽键。由肽键连接形成的化合物称为肽。检测方法分别向甲、乙两支试管加入3毫升蛋清稀释液和清水,再依次向两支试管中加入双缩脲试剂A液和B液。观察甲、乙两试管中溶液发生的颜色变化。上述的演示实验结果表明,双缩脲试剂与蛋白质呈现紫色反应。

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