武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷,由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色,依托光谷生物城技术产业优势,面向提供的生物技术服务。
在酵母的有性生殖过程中涉及到两种配合类型:a接合型和α接合型,这两种单倍体之间接合(mating)能形成二倍体,但a接合
植物组织原位杂交技术服务
武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷,由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色,依托光谷生物城技术产业优势,面向提供的生物技术服务。
在酵母的有性生殖过程中涉及到两种配合类型:a接合型和α接合型,这两种单倍体之间接合(mating)能形成二倍体,但a接合型细胞之间或α接合型细胞之间不能接合形成二倍体。根据酵母有性生殖的这一特点,他们将文库质粒转化α接合型酵母细胞,“诱饵”表达载体转化a接合型细胞。对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落(100-200)进行筛选时,可采用该方法。
武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷,由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色,依托光谷生物城技术产业优势,面向提供的生物技术服务。基本原理是荧光标记的核酸探针在变性后与已变性的靶核酸在退火温度下复性。
原位杂交技术发展史
原位杂交技术(In situ hybridization,ISH)是由分子生物学、组织化学及细胞学相结合而产生的一门新兴技术,始于20世纪60年代。
1969年美国耶鲁大学的Gall等(1969)首先用爪蟾核糖体基因探针与其卵母细胞杂交,将该基因进行定位,与此同时Buongiorno—Nardelli和Amaldi等(1970)相继利用同位素标记核酸探针进行了细胞或组织的基因定位,从而创造了原位杂交技术。物种包含水稻、油菜、玉米、大豆、高粱、拟南芥等等各种植物种类。
自此以后,由于分子生物学技术的迅猛发展,特别是20世纪70年代末到80年代初,分子、质粒和噬菌体DNA的构建成功,为原位杂交技术的发展奠定了深厚的技术基础。
武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色,依托光谷生物城技术产业优势,面向提供的生物技术服务。
FISH:采用了已知序列的、特异性的单链核酸作为探针,标记了生物素或荧光素,在一定的温度和离子浓度下通过碱基互补配对法则,使得DNA-DNA原位杂交,采用荧光法显示,将DNA在细胞爬片、组织切片(石蜡切片or冰冻切片)的原始位置上标记出来的一种技术。所谓假阳性就是:在待研究的两个蛋白间没有发生相互作用的情况下,报告基因被。
原位杂交在前。
(1)常规脱蜡入水。
(2)37℃蛋白酶K消化20min,37℃漂洗液充分洗去蛋白酶K。
(3)滴加探针,加盖玻片,避光、湿盒、37℃过夜孵育。
(4)如果试剂盒允许的话,将试剂盒中洗脱液水浴加温至37℃震荡洗脱多余的探针。
(5)加碱性磷酸酶标记的抗1体,37℃孵育半小时,洗去抗1体后显色。
免1疫组化在后。
(1)将显色后确认为阳性的切片充分漂洗。
(2)在PH为6.0的枸橼酸钠溶液中,微波至96℃左右,作用10min。
(3)滴加一抗,37℃湿盒孵育2h。
(4)充分漂洗切片,滴加二抗,室温下孵育40-50min。
(5)DAB显色后,采用PBS中止显色反应。
(6)不要复染核,不然就盖住原位杂交信号了。
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