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生物素亲和试剂常用指南 武汉友名生物

细胞增殖是生活1细胞的重要生理功能之一,是生物体的重要生命特征。细胞的增殖是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。 越来越多的研究者们已经把目光集中到了细胞增殖检测,关于细胞增殖检测的方法也在不断更新。那么到目前为止,研究细胞增殖有哪些手段呢? 细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿1瘤medicine效果的基础实验手段。准确的检测细胞增殖方法是BrdU
生物素亲和试剂








细胞增殖是生活1细胞的重要生理功能之一,是生物体的重要生命特征。细胞的增殖是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。

越来越多的研究者们已经把目光集中到了细胞增殖检测,关于细胞增殖检测的方法也在不断更新。那么到目前为止,研究细胞增殖有哪些手段呢?

细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿1瘤medicine效果的基础实验手段。准确的检测细胞增殖方法是BrdU法。而EdU法检测试剂盒是Brdu方法的革命性突破。EdU试剂盒是一种嘧1啶类似物,可以在DNA合成期整合入DNA双链。通过以上原理图的对比,大家不难发现,EdU法检测细胞增殖,无须抗1体,无变性步骤,保持细胞形态和DNA完整性,是一种简单,可靠,省事的方法。





五种生化试剂盒的研究意义

多酚氧化酶(PPO)(EC1.10.3.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,属于一种氧化酶,通常在铜离子存在下,能使一元酚和二元酚氧化产生醌,从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶和组培等密切相关。

钾离子对于维持机体的正常渗透压及酸碱平衡有非常重要的作用,参与糖及蛋白代谢,保证神经肌肉的正常功能。血1清钾高于5.5 mmol/L时称高血钾,高血钾可使神经、肌肉应激性升高,使心肌应激性降低,导致心动过缓,血1清钾超过10 mmol/L时,可发生心室纤颤,甚至心脏在舒张期停跳。血1清钾3.5 mmol/L时称低血钾,低血钾可引起肌无力甚至肌肉弛缓性麻1痹,引起心肌应激性升高,出现心动过速、心律紊乱甚至在收缩期停跳。因此,血1清钾是常用生化测定指标。

脂肪代谢是机体内非常重要的代谢途径之一,其在细胞内的存储和利用对于维持细胞正常的能量代谢非常关键,且在细胞内环境稳态的维持上发挥着不可忽视的作用。越来越多的研究显示脂肪代谢与core的发展有着一定的关系;细胞异常增殖是所有bad core细胞的一个常见特性,在细胞异常增殖的过程中细胞膜和信号分子的形成需要更多的脂肪代谢中脂肪酸代谢和脂滴代谢的参与。





【从植物材料或植物培养细胞中提取基因组DNA】

① 按下表称取适量的新鲜植物材料(如选用的是冷冻干燥植物材料,则用量减半),剪成小块放入研钵中,加入液氮,待样品冷冻完全后、用力研磨至粉末状。研磨时应间断加入液氮以防止材料融化。

植物材料使用量 植物花、叶片10~100 mg 植物茎60~240 mg 植物根80~240 mg 植物种子80~240 mg 如选取植物的根、种子等样品时,因其基因组DNA含量很低,需使用超过表格中所示的参数用量,此时请分两管进行步骤1~6的实验操作,在步骤7的操作中再将各管溶液分次加入至同一Spin Column中过滤,使各管的基因组DNA结合到同一个Spin Column上。如从培养的植物细胞中提取基因组DNA,请离心收集2×103~1×107的培养植物细胞,加入150 μl水充分悬浮细胞后移入研钵中,加入液氮后、用力研磨至粉末状。

注)样品研磨应充分,否则将会严重影响基因组DNA的收率。

② 将研钵移至65℃水浴,当样品粉末刚开始融化时,向研钵中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1,用力碾磨30秒。






③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆移至Collection Tube中。如匀浆体积不足650 μl,请补充Solution A至650 μl。65℃保温15分钟。注)处理富含纤维的根/茎等植物材料或富含淀粉、蛋白质的种子等时,可延长水浴时间至60分钟。


棉花等酚类、多糖类物质较多的植物DNA提取法:

1 取2g新鲜幼嫩的叶片放入研钵中,加入液氮后、充分研磨,待成极细的粉末状时迅速转入到50ml离心管中。

2 在50ml离心管中加入10ml冰预冷的提取缓冲液,在涡悬振荡器上充分混匀。

3 于4℃,2700×g离心20分钟,倒去上清液。

4 在沉淀中加入5ml裂解缓冲液,在涡旋振荡器上充分混匀

5 于65℃水浴锅中温育30min。

6 加入5ml氯1仿/异戊1醇(24/1),并上下翻转以充分混合。

7 于4℃,2700×g离心5分钟。

8 转移上层水相至一新的50ml离心管中。

9 重复步骤7-9一次。

10 加入2/3体积的冰预冷的异丙1醇,并上下翻转以充分混合,至-20℃2h。

11 于4℃,1200×g离心10min。

12 在一新管中加入20ml含80%乙醇15mmol/LNaAc溶液,用玻棒将DNA转入该管(如不能直接用玻棒缠出,可离心后倒出上清,再在其中加入20ml含80%乙醇15mmol/LNaAc溶液),放置20min后稍许离心,移走上清并吸出残存乙醇,室温干燥。

13 加入1 0mlTE(10mmol/LTris-HClPH=8 0,1mmol/LEDTA)并加入终浓度为20(g/L的RNaseA,过夜。

14 风干,用50μlTE缓冲液溶解,存于-20℃备用。






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