以上问题,可通过倍玛特程序降温仪对降温速率的“精细控制”轻松解决——降温的不同阶段,采用不同的降温速率,可有效减少细胞损伤,提高复苏率。一般为“先慢冻,后快冻”。目前市面上常用的倍玛特程序降温仪工作原理是:通过微处理器控制系统和电磁阀,控制喷入腔体中的液氮量来控制降温速率。其优点是:控温,受外界环境影响小。尤其是处理大体积样本时,喷入的大量液氮更易带走样本中的潜热,从而
振荡型恒温金属浴
以上问题,可通过倍玛特程序降温仪对降温速率的“精细控制”轻松解决——降温的不同阶段,采用不同的降温速率,可有效减少细胞损伤,提高复苏率。一般为“先慢冻,后快冻”。目前市面上常用的倍玛特程序降温仪工作原理是:通过微处理器控制系统和电磁阀,控制喷入腔体中的液氮量来控制降温速率。其优点是:控温,受外界环境影响小。尤其是处理大体积样本时,喷入的大量液氮更易带走样本中的潜热,从而降温,保证更好的样本复苏活性。
冷冻保护剂又是什么呢?它主要用于在低温保存生物样品过程中降低细胞的冷损伤。目前,常用的冷冻保护剂主要分为渗透性的低温保护剂和非渗透性的低温保护剂2大类。渗透性的低温保护剂是指在低温保护剂添加到细胞悬浮液后,可以渗透到细胞膜内部的来置换出细胞的水分。渗透性低温保护剂主要有甘油、DMSO、丙二醇、乙二醇等。非渗透性低温保护剂是指不能渗透到细胞膜内部。常见的非渗透性低温保护剂有海藻糖、葡聚糖等。此外近年来,也经常使用抗冻蛋白作为新型的低温保护剂。
步骤:(1)冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基,使细胞处于指数生长期。(2)配制冷冻保存溶液(使用前配制):另取一离心管,加入培养基、,逐滴加入二亚砜 (DMSO)至20%浓度,即制成双倍的冻存液,置于室温下待用。(3)离心收集培养之细胞,用加的培养基重悬起细胞,取少量细胞悬浮液(约0. 1 ml)计数细胞浓度及冻前存活率。(4)取与细胞悬液等量的冻存液,缓慢逐滴加入细胞悬液,并晃动试管,制成细胞冻存悬液(DMSOzui后浓度为5~10%),使细胞浓度为1~5×106cells/ ml,混合均匀,分装于已标示完全之冷冻保存管中,1~2 ml/vial,并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后,注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。
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