RNA提取
1.弃去培养液,用PBS清洗两次1-2。
2.弃去PBS,用1000u1吸干净残余PBS。
3.加1ml TRIZOL研磨B 41。
4. 1.5mIEP管标号与每孔相对应备用。
5.研磨好的溶液转移至对应的 EP管。
6.往每个EP管中加入250ul,剧烈震荡30s, 冰上静置12min[问l。
7. 所有样品4C离心
dna检测
RNA提取
1.弃去培养液,用PBS清洗两次1-2。
2.弃去PBS,用1000u1吸干净残余PBS。
3.加1ml TRIZOL研磨B 41。
4. 1.5mIEP管标号与每孔相对应备用。
5.研磨好的溶液转移至对应的 EP管。
6.往每个EP管中加入250ul,剧烈震荡30s, 冰上静置12min[问l。
7. 所有样品4C离心,转速: 13500转1分钟,时间: 15min.
8. 再次标记一批同样编号EP管。
9.离心后吸上清液400u1移入相应编号的EP管中,再加入400ul异充
分混匀。4C冰箱35min。
10. 4C离心,转速: 13500转1分钟,时间: 10min.
11.弃去.上清液,加1m175%乙醇,轻摇7]。
12. 4C离心,10600转/分钟,时间: 5min.
13. 弃上清液滤纸吸干。
14. 加DEPC水10ul溶解,-80C保存。进行逆转录前测浓度。
组织RNA提取
1、剪米粒大小组织块放入EP管中标号。
2、EP管中加300ul trizol浸泡30分钟或更久。
3、用研磨棒研磨,以肉眼很难看到组织为宜。
4、加700u1 trizol静 置5分钟。
凝胶阻滞迁移电泳检测服务(EMSA)
凝胶迁移或电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)是一种研究DNA/RNA结合蛋白和其相关的DNA/RNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。依据实验需要,设计标记探针、非标记探针、蛋白特异性抗ti等参照物,基于DNA-蛋白质或RNA-蛋白质复合体在聚bing烯酰胺凝胶电泳(PAGE)中有不同迁移率的原理,当转录因子与特异的DNA或RNA结合后,其在PAGE中的迁移率将小于未结合核蛋白转录因子的DNA,从而检测到活化的与DNA或RNA结合的蛋白转录或调节因子。以目标蛋白质3个重复具有相同趋势,目标蛋白质相邻位点的相对一致性,至少2个重复有2倍以上差异作为判定差异表达蛋白质的标准。
蛋白质互作验证服务
在后基因组时代,基因的表达产物蛋白质作为生物功能直接的执行者和体现者,在生物集体的生理及病理中扮演着重要的角色。高通量的蛋白质组学研究技术可以在上述过程中筛选出具有潜在价值的生物标记和靶点。但是长期以来,大规模的蛋白质表达分析谱并没有提升我们对生物标志物的认识,其主要原因是差异蛋白的分析结果缺乏规模化的验证。随着对lncRNA在哺乳动物进化及人类疾病发生和发展中作用的日益关注,lncRNA调控机制已成为当前遗传学研究的热点问题。
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