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在遐迩的澳大利亚生物医学发现研究所看来,了解人体反应的机制对于他们正在进行的过敏反应、药过敏反应和的研究至关重要。研究者们正在利用蛋白质组学数据来识别反应的靶点,开发具有抗原特异性的药,同时将质谱分析应用于早期发现阶段和随后的靶向分析。
澳大利亚的生物化学和分子生物学系是
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在遐迩的澳大利亚生物医学发现研究所看来,了解人体反应的机制对于他们正在进行的过敏反应、药过敏反应和的研究至关重要。研究者们正在利用蛋白质组学数据来识别反应的靶点,开发具有抗原特异性的药,同时将质谱分析应用于早期发现阶段和随后的靶向分析。
澳大利亚的生物化学和分子生物学系是澳大利亚至大的研究机构,拥有大约53个独立实验室,有400多名科学家和研究生。该研究所隶属于莫纳什生物医学发现研究所,该研究所领导六个研发项目:、疾病、和发育、和、代谢性疾病和肥胖、神经科学。有个人是蛋白质组学实验室的负责人,他说:“我的团队需要进行质谱分析,我在研究所的一项职责就是将质谱技术应用于蛋白质组学和小分子分析研究。本组在四个研究方向上采用这项技术,主要应用于人类疾病过程中反应靶点的识别。
他说:“我们希望发现那些能威胁生命的药出现的反应机制,并且发展出针对类性和1型的抗原特异性疗法。此外,我们也有多种研究项目,如学鉴定新抗原表位,以及利用蛋白质组学和肽组学定量方法理解反应中的关键识别规律等。多学科交叉研究为我们提供了有关疾病的新观点,例如,自身疾病可能与有直接关系。」
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SCIEXLabs则花费了大量的时间进行多级方法验证,这是一项非常耗时的工作。为什麽这样不遗余力地去做验证这一工作,刘华芬觉得至初的想法和动力来自于她从临床市场中得到的启示。“六年前, SCIEX在临床医学市场上的生意并不红火,而我们的 LC/MS/MS/MS已经引i领了北美临床市场。
多年前,仪表操作人员对整体解决方案的需求开始出现,行业中也出现了一些方法。在真正的仪器使用者手中,这些方法总会暴露出各种各样的问题,不能称之为真正有效的“解决办法”,刘华芬发现了这一点,开始更加关注真实样品基质中的重现性。期望通过至新的样本处理技术,反复验证并持续改进,为用户提供真正的问题解决方法。如果验证和改进所用的时间能够使这个方案真正解决问题,那么花这么多时间是值得的。
很多次的试验证明确实能换来用户的信任,刘华芬转述了北美用户对 SCIEX解决方案的看法:“我知道你们的方法能帮助我成功,因此我们很乐意购买 SCIEX产品。现在,方法验证和方法开发一起被称为 SCIEXLabs的两个主要组成部分。
高i效液相色谱法概述:
高i效液相色谱 (高i效液相色谱)作为一种高i效、的分析分离技术,在上个世纪70年代得到迅速发展,是现代分离检测的重要手段。层析法的分离原理是:当溶解于流动相(mobile phase)的各组分通过固定相(station phase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和),其大小、强弱不同,在固定相中的滞留时间也不同,从而先后从固定相中流出。也叫色层法,色谱法。
高i效液相色谱是从经典的液相色谱方法发展而来,它以液体为流动相,并且采用了微粒细粒高i效固定相的柱层析分离技术。它的分离机理与普通的柱色谱一样,但填料更精细,需要高压泵推动,柱效高,分析速度快。在液相色谱中,流动相也参与了组分的分离过程,其组成、比例和 pH值可以灵活调整,分离方式多样。实践中,对不同样品进行分离,主要是通过改变流动相组成来调节样品在色谱柱的保留程度和选择性。
高i效液相色谱技术自上世纪60年代出现以来,由于采用了高压输液泵、全多孔微粒填充柱和高灵敏度检测器,实现了对样品、高i效、灵敏的分离检测。高i效液相色谱技术的引入,使液相色谱吸收了经典液相色谱的发展经验,大大提高了仪器的自动化水平和分析精度。目前采用微处理器控制的液相色谱系统,不仅自动化程度高,而且可以控制仪器的操作参数(如溶剂梯度洗脱、流动相流量、柱温、自动进样、洗脱液收集、检测器功能等),同时还可以缩放、叠加得到的色谱图,并对保留的数据和峰高、峰面积进行处理等,为色谱分析工作者提供了一种、全功能的分析工具。
在分析型高i效液相色谱中,目前常用的进样阀是7725型进样阀,它的内部六通结构使进样阀的进样操作十分方便,但如果使用不当,也会造成麻烦。举例来说,在高i效液相色谱检测过程中,色谱峰异常和重复性较差的情况时有发生,这主要是由于使用方法不当造成的,要解决这类问题,需要从以下几个方面着手。
1、进样控制。当采用进样阀进样时,该阀的样品环是定量的(一般分析型进样阀的样品环体积为20 ul),因为进样阀内的样品溶液在样品环的管道中有径向的速度梯度(即在普通分析进样阀的样品环体积为20 ul)。所以,要在样品环中填充样品溶液,从而用进样阀精i确定量,就必须使进样量大于样品环体积的2倍。若用注i射器控制进样量,至大只能注射样品环体积1/2的量,这样可以防止溢流管溢流而造成定量误差。
2、进样阀的清洗问题。若样品环上有至后一次进样时的残留物,则下一次注射样品一定会受到污染,为了防止这一现象的发生,应按照以下步骤进行: a.进样阀有两个位置: INJECT和 LOAD。先在 LOAD位置,用一个注i射器将流动相在进样阀中清洗几次,每次用量约为40 ul; b.然后将进样阀板手柄拧入 INJECT位置时,用流动相清洗几次,每次用量还为40 ul; c.至后,再将样品注入进样阀。