PEG法
其基本原理是在二价阳离子(Mg2+、Ca2+等)存在的情况下,PEG能够有效地诱导DNA产生颗粒状沉淀,从而使细胞膜能够通过内吞噬作用吸收这种DNA颗粒。
1993年Golovkin等用PEG法将H89的原生质体与含有鼠二氢叶酸还原酶(DHFR)突变基因(氨甲1喋呤抗性)的质粒共培养,此基因插入了玉米Ds1转座子中。筛选得到的愈伤组织,在不含激
植物转基因载体
PEG法
其基本原理是在二价阳离子(Mg2+、Ca2+等)存在的情况下,PEG能够有效地诱导DNA产生颗粒状沉淀,从而使细胞膜能够通过内吞噬作用吸收这种DNA颗粒。
1993年Golovkin等用PEG法将H89的原生质体与含有鼠二氢叶酸还原酶(DHFR)突变基因(氨甲1喋呤抗性)的质粒共培养,此基因插入了玉米Ds1转座子中。筛选得到的愈伤组织,在不含激1素的培养基上再生长出植株。同年Omirulleh等用PEG法将外源基因导入到了HE89的原生质体中,建立了植株再生的转化体系。
PEG法虽然转化效率较高,但必须以裸1露的原生质体为受体,而且还受到基因型的限制。
腺病毒呈无囊膜的球形结构,其病毒粒子在感1染的细胞核内常呈晶格状排列,每个病毒颗粒包含一个36 kb的线性双链DNA,两端各有一个100~600 bp的反向末端重复序列(inverted terminal re-pea,t ITR), ITR的内侧为病毒包装信号,是病毒包装所需要的顺式作用元件。基因组包含早期表达的与腺病毒copy相关的E1~E4基因和晚期表达的与腺病毒颗粒组装相关的L1~L5基因。
线状双股DNA与核心蛋白形成直径为60~65 nm的髓芯,被包裹于衣壳内。衣壳呈二十面体对称,由252个直径8~10 nm的壳粒组成,壳粒排列在三角形的面上,每边6个,其中240个为六邻体(非顶点壳粒) ,另12个为五邻体基底(顶点壳粒)。每个六邻体是六邻体蛋白的同源三聚体,三聚体的六邻体分子有一个三角形的塔尖和五面体的基底,塔区由4个环构成即loop1、loop2、loop3、loop4,基底包含两个区域P1、P2区[3]。六邻体上的表位(epitope)是诊断不同血1清型的标准,它包括哺乳动物腺病毒属的抗原成分,是病毒体对免1疫选择压力zui敏感的部位。
每个五邻体基底上结合着1根(哺乳动物腺病毒)或2根(禽腺病毒)长9~77. 5 nm的纤维突起,这些纤维以五邻体蛋白为基底由衣壳面伸出,纤维顶端形成头节区,纤突有血1清特异性,且含有负责体外血细胞凝集的种属特异性抗原决定位点。
转1基因技术是伴随着对生物体的认识才发展起来的技术,在生物本身还未完完全全地认识的情况下进行基因层次的修饰,出现预料不到的结果和不确定性与不能解释的情况是肯定的。其造成各种不确定性的来源包括: 基因从原有机体转人宿主有机体中,两者的生理的差异对终产物影响而导致的安全性问题。
转移的基因结构的稳定性。确保经遗传修改的生物已获得要表达良性性状所需的zui小DNA部分片段,由于DNA结构的稳定有助于性状表达的稳定,额外的DNA部分片段可能导致基因沉默或终产物的表达不稳定,甚至产生不需要的性状或有毒物质。 基因插人受体基因组的位置和拷贝数的不确定性。无论是农杆1菌介导法、基因枪法、花粉管通道法、PEG介导电1击法等,质粒在进人宿主基因组的位置与数量均是不确定的,目的基因的表达量难以预料,同一批的转1基因材料可能存在差异。
转1基因载体引起的不确定性。食用具抗生1素耐药性的选择性标识基因可能会影响人的抗病能力。Netherwood等分别让7个肠道炎的和12个健康的志愿者食用添加转1基因大豆(EPSPS)的汉堡和豆奶昔,虽然在12个健康个体的粪便中没有发现转1基因,但在7个肠道炎志愿者的xiao肠中都发现了转1基因,其中的3个出现有转1基因向肠道微生物转移的现象,即有可能抗生1素标记会转移到肠道微生物上。
(作者: 来源:)