细胞实验介绍——细胞运动能力检测:
细胞划痕实验是体外模拟细胞迁移能力和修复能力快捷的检测方法。在长满的细胞培养板或者培养皿中,沿着中线使用移液器头或者其他硬物划1-3条平行的直线,去除中线的细胞,细胞在0h、12h、24h后,观察细胞往中线迁移情况,判断细胞迁移能力。
一般流程:细胞接种培养-划痕-不同时间点拍照
细胞迁移和侵袭实验是体外模拟细胞迁移和侵袭能
细胞生物学实验
细胞实验介绍——细胞运动能力检测:
细胞划痕实验是体外模拟细胞迁移能力和修复能力快捷的检测方法。在长满的细胞培养板或者培养皿中,沿着中线使用移液器头或者其他硬物划1-3条平行的直线,去除中线的细胞,细胞在0h、12h、24h后,观察细胞往中线迁移情况,判断细胞迁移能力。
一般流程:细胞接种培养-划痕-不同时间点拍照
细胞迁移和侵袭实验是体外模拟细胞迁移和侵袭能力的检测方法。使用不同孔径的聚碳酸酯膜transwell小室放入培养板中,将细胞接种于小室中,利用培养液成分的差异诱导细胞运动,检测细胞的迁移和侵袭能力的差异。
一般流程:transwell小室准备-细胞接种-细胞培养-transwell小室染色-显微镜拍照
结果示例:
图 A 细胞划痕实验图;B,C 细胞迁移和侵袭实验图
大鼠gu髓间充质gan细胞的分离
操作方法
(1 )取SD大鼠( 2周龄),颈椎脱臼法处死后立即用75%乙醇浸泡,移入超净工作台内,用大头针固定大鼠四肢于工作台面的泡沫板上。
(2)碘酒擦拭四肢,再用酒精棉球擦拭,无菌条件下用灭菌消毒后的镊子和剪刀分离出大鼠股骨和胫骨,剔除骨头表面肌肉, PBS溶液冲洗两遍。
(3 )从中间剪断股骨和胫骨,用2ml无菌注she器吸取DMEM/F 12溶液冲出gu髓细胞多次,再用针头吹打,吸管吸入离心管内,1000r/min离心5min,弃上清,用PBS重悬细胞。
(4 )缓慢将细胞悬液加入预先装有5mL淋巴细胞分离液的15mL离心管内,保持细胞悬液在淋巴细胞分离液上层,注意不要搅动液面,保持二者分层界面。
(5 ) 2000rpm离心15-25min,离心后溶液分4层,吸取中间骨sui基质细胞层(白色浑浊状), PBS洗三次。
(6)用含15%胎牛xue清及青链mei素的DMEM/F 12以106/mL的细胞浓度接种于25cm2培养瓶中, 置37°C、5%CO2恒温培养箱中培养。
( 7 ) 24小时后弃去培养液(看细胞贴壁情况),PBS冲洗2-3次去除末贴壁细胞,加入培养液继续培养。以后每3d半量换液1次,-般10d细胞生长融合。
(8 )经0.25%胰酶消化,1 : 2传代,其后一般3-5d传代1次,选取生长良好的第三代细胞进行后续实验。
细胞检测服务
作为生物体结构和功能的基本单位,细胞在机体的各项新陈代谢的生命活动中发挥着重要的作用,与此同时,细胞的生理过程,在一定程度上也是机体生命活动的反应。因此利用多种精密仪器,结合特异性的检测试剂,对体外培养的细胞直接检测其增殖的基本过程,或对细胞进行不同的处理后检测细胞生活周期内各项指标的变化,从而深入揭示细胞新陈代谢的具体机制。目前有多种分选人、小鼠、大鼠以及非人类灵长类细胞的MACS直标微珠可供选用。

BrdU染色原理
BrdU (5-脱氧尿核苷)是胸腺的衍生物,常用于标记中新合成的DNA,可代替胸腺选择性整合到细胞中新合成的DNA中(细胞周期S期)。这种掺入可以稳定存在,随着DNA进入子细胞中BrdU特异性可以用于检测BrdU的掺入,从而判断细胞的增殖能力。处死孕鼠,全身置于75%酒精里浸泡,然后在超净台中用剪刀和镊子将孕鼠皮肤剪开,用另外--组剪刀、镊子剪开腹部肌层,露出,后用第三组剪刀和镊子将小心取出放在盛有D-PBS的玻璃平皿中,冲洗去血。BrdU特异性可以用于检测BrdU的掺入,从而判断细胞的增殖能力。
注射或细胞培养后利用抗Brdu单,ICC染色,显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物,双重染色,可判断增殖细胞的种类,增殖速度,对研究细胞动力学有重要意义。因组织细胞内无内源性Brdu存在,所以Brdu应用较广掺入双链DNA内的Brdu,以氢链与腺呤结合,不能直接与抗Brdu反应,需经解链使Brdu暴露方能被染色。6ml明胶-底物液,约3min,混合液凝固,将培养板取出,置室温5min,将板倒置,用肉眼和低倍放大镜计数所显示出的颜色的斑点。常用的解链方法为盐酸加热、蛋白酶处理等,使DNA双链部分单链化,抗Brdu小鼠单与增殖细胞核内的Brdu结合,再经酶标抗小鼠IgG孵育、

呈色,显示进入S期细胞的情况。
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