pcr扩增的基本原理
基本原理:PCR技术的基本原理类似于DNA的天然copy过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。DNA的半保留复1制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则copy成同样的两分子拷贝。
在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以
定量反转录试剂盒
pcr扩增的基本原理
基本原理:PCR技术的基本原理类似于DNA的天然copy过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。DNA的半保留复1制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则copy成同样的两分子拷贝。
在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复1制。
差示PCR (differential PCR, d -PCR)技术
d-PCR可以定量检测标本靶基因的拷贝数。它是将目的基因和一个单拷贝的参照基因置于一个
试管中进行PCR扩增。电泳分离后呈两条区带,比较两条区带的丰度,或在引物5°-端标记上放1射性核素后.通过检测两条区带放1射性强度即可测出目的基因的拷贝数。
定量PCR(quantitative PCR, qPCR)技术
qPCR技术是用合成的RNA作为内标来检测PCR扩增目的mRNA的量,涉及目的mRNA和内标用
相同的引物共同扩增.但扩增出不同大小片段的产物.可容易地电泳分离。一种内标可用于定量多种不同目的mRNA。qPCR可用 于研究基因表达。能提供特定DNA基因表达水平的变化.在癌1症、代谢紊乱及自身免1疫性疾病的诊断和分析中很有价值。
目前的病毒核酸检测试剂盒,多数采用荧光定量PCR方法,通过检测荧光信号的累积来确定样本中是否含有病毒核酸。那么,核酸检测到底需要经过哪些步骤呢?概括起来,是 取样、留样、保存、核酸提取和上机检测五个步骤。
取样
采集人体的分泌物。用鼻咽拭子或咽拭子擦拭鼻腔或咽后壁及双侧扁桃体处
留样
将拭子头浸入细胞保存液中,折断尾部后立即旋紧管盖
保存
将样本管放入密封袋中保存好,并及时送检
核酸提取
将样本送进实验室进行核酸提取
上机检测
将提取物进行荧光PCR扩增反应
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