突变是指在PCR 过程中通过碱基错配从而引起蛋白质氨基酸的改变.
突变的应用:蛋白质相互作用
受体或配体结合结构域的界定;蛋白质相互作用结构域的鉴定
通过改变密码子偏性以提高表达水平,改变蛋白质活性,改变蛋白抗原性、稳定性和溶解性,改变酶的特异性,或许以及动力学特性,增加标签等.
DNA 元件
启动子或增强子,载体创建
Ras(G13D)点突变抗体
突变是指在PCR 过程中通过碱基错配从而引起蛋白质氨基酸的改变.
突变的应用:蛋白质相互作用
受体或配体结合结构域的界定;蛋白质相互作用结构域的鉴定
通过改变密码子偏性以提高表达水平,改变蛋白质活性,改变蛋白抗原性、稳定性和溶解性,改变酶的特异性,或许以及动力学特性,增加标签等.
DNA 元件
启动子或增强子,载体创建
突变的流程
1. 在dam+ 阳性的宿主菌E. coli.增殖获得化的模板DNA
2. 设计2条互补匹配的、突变位点居的突变引物
3. 加入反应组分如buffer、 template、dNTP、complementary mutagenic primers、QuikSolution&QuikChange Lightning Enzyme
4. 运行反应
5. Dpn I 消化化的模板
6. 转化感受态细胞、铺板筛选
7. 提取 DNA、测序鉴定
点突变(point mutation)是基因突变的一种类型,表示储存遗传信息的DNA序列或RNA序列中有一个碱基或是一个核苷酸发生变化,通常有两种情况:一种碱基或核苷酸被另一种碱基或核苷酸所替换;一个碱基的插入或缺失。
按照突变之后的功能,可以将点突变分成三个类型:
无义突变(nense mutation):使原本翻译为氨基酸的密码变成停止密码,例如TTC变成ATC。
错义突变(missense mutation):使密码所对应的氨基酸改变,例如TTC变成TCC。
沉默突变(silent mutation):密码改变但对应的氨基酸不变,例如TTC变成TTT。
T.H.摩尔根在饲养的许多红色复眼的果蝇中偶然发现了一只白色复眼的果蝇。这一事实说明基因突变的发生在时间上、在发生这一突变的个体上、在发生突变的基因上,都是随机的。以后在高等植物中所发现的无数突变都说明基因突变的随机性。在细菌中则情况远为复杂。在含有某一种的培养基中培养细菌时往往可以得到对于这一具有抗性的细菌,因此曾经认为细菌的抗药性的产生是引起的,是定向的适应而不是随机的突变。

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