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实验步骤:
1、弃去板内液体,洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。再在每个标本的6孔中分别加入6种酶标二抗各100μl,通用阳性、阴性对照的各孔也一样。在加样图上或酶标板上做好标记。贴上封板膜37℃温育30分钟。
2 、吸弃板内液体
HRP-小鼠抗大鼠 IgG (H+L)
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实验步骤:
1、弃去板内液体,洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。再在每个标本的6孔中分别加入6种酶标二抗各100μl,通用阳性、阴性对照的各孔也一样。在加样图上或酶标板上做好标记。贴上封板膜37℃温育30分钟。
2 、吸弃板内液体,洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。每孔分别加入显色剂 A 和显色剂 B 各50μl,换一张新的封板膜贴板避光37℃显色20分钟。
3 、ELISA试剂盒特异性好一般肉眼即可观察出结果,看显色蓝的那个孔所对应的酶标二抗就知道此标本的 Ig 类或亚类。更可将反应终止液(每孔50μl)终止反应后用酶0标仪450nm 测长,630nm 参考波长双波长测定结果,参看高值孔所对应的酶标二抗就知道此标本的 Ig 类或亚类(阳性对照 OD 一般不小于0.8,阴性对照一般不高于0.15,阳性判定标准:样品 OD 大于阴性 OD+0.15,阴性 OD 0.05按0.05算)。
博奥龙公司主要产品有抗0体制备全套产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关试剂及诸多特色产品和特色技术服务。
1、一次没用完的板子要带干燥剂放自封袋封好,随盒存放。
2、拿放板子时不要剧烈抖动,以免孔间交叉污染出现错误结果。
3、本试剂一般不会出现两个阳性,但出现两个阳性的现象不论在进口或国产试剂中都是真实存在的,一般会一个 OD 很高,另一个很低但却还能判为阳性,实验分析表明这种情况下以 OD 高值孔为准,出现这种情况有多重原因:
(1)培养的细胞中有饲养细胞残留,
(2)抗0体本身存在变异,
(3)样品为非特异亲和纯化的抗0体或样品是腹0水,
(4)上清出现少量污染,
(5)实验操作粗放,
(6)加错试剂。
4、通用阳性对照数据并不一定完全一样,仅作为试剂有效指示。
单克0隆抗0体(单抗制备)制备过程有以下几个步骤:
步骤一:细胞免0疫
免0疫动物免0疫动物是用目的抗原免0疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠,按照预先制定的免0疫方案进行免0疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免0疫器0官,刺激相应B淋巴细胞克0隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。
步骤二:细胞融合
采用眼球摘除放血法处死小鼠,无菌操作取出脾0脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨0髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙 二醇。在聚乙 二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨0髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞。
博奥龙公司主要产品有抗0体制备全套产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关试剂及诸多特色产品和特色技术服务。
不同细胞表面具有不同Ig的Fc受体,分别用FcγR、FcεR、FcαR等来表示。当Ig与相应抗原结合后,由于构型的改变,其Fc段可与具有相应受体的细胞结合。抗0体与Fc受体结合可发挥不同的生物学作用:
1.介导I型反应变应原刺激机体产生的IgE可与嗜碱性粒细胞、肥大细胞表面IgE高亲力受体细胞脱颗粒,释放组胺,合成由细胞FcεRI结合。
2.调理吞噬作用 调理作用(opsonization)是指抗0体、补体C3b、C4B等调理素(opsonin)促进吞噬细菌等颗粒性抗原。
3.发挥抗0体依赖的细胞介导的细胞毒作用。
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