转染试剂简介:
其中病毒载体的特点是整和效0率高, 可使外源基因在宿主细胞中长期表达,缺点是存在潜在的安全危险性。电穿孔法及显微注0射法的特点是转染率较高,缺点是需要昂贵的仪器,前者对细胞的损伤较大,后者在导入DNA 时需要一个细胞一个细胞地注0射,不适合大量细胞研究的需要。
人们一直在寻找更有效、毒性小同时对研究影响也小的转染试剂。由于脂质类转染试剂对细胞的毒性是
增强型转染试剂
转染试剂简介:
其中病毒载体的特点是整和效0率高, 可使外源基因在宿主细胞中长期表达,缺点是存在潜在的安全危险性。电穿孔法及显微注0射法的特点是转染率较高,缺点是需要昂贵的仪器,前者对细胞的损伤较大,后者在导入DNA 时需要一个细胞一个细胞地注0射,不适合大量细胞研究的需要。
人们一直在寻找更有效、毒性小同时对研究影响也小的转染试剂。由于脂质类转染试剂对细胞的毒性是由其脂质特性决定的,众多的研究者和生物公司将新一代转染试剂的开发聚焦在非脂质体的聚合物上,并已有一些优0秀的试剂产品上市。

1.以 24 孔细胞板转染实验为例,推荐一次(即每孔)转染的低内毒0素质粒 DNA 用量为 1~2μg、转染试剂用量为 3~5μl(请在正式实验前根据不同细胞和不同培养基用报告基因进行优化),质粒和转染试剂可用无菌生理盐水稀释。
2.QuickShuttle 经过 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常规培养基测试,虽然在实验中推荐使用 DMEM,但有实验结果表明 M199 能够显著增强 QuickShuttle 对 Vero 细胞和 293FT 细胞的转染效果,因此可尝试使用不同培养基对转染条件进行优化。
1. 将上述复合物直接加入到细胞培养基中,轻摇细胞板或用加样器吸打混匀。备注:转染复合物可直接加入含血0清的细胞培养基中进行转染。在极0少情况下会出现贴壁细胞脱落现象,可先从待转染细胞孔中吸取 500μl 培养基与转染复合物预混后再加入细胞中。若在细胞瓶中进行转染,直接加入到无细胞贴壁的对面或侧面并摇匀即可。
2. 将细胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中进行培养。备注:无需在转染后 4~6 小时补加血0清或更换培养基。
3. 24~72 小时后根据实验需要进行瞬时表达分析或稳定细胞系加压筛选。
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将上述复合物直接加入到细胞培养基中,轻摇细胞板或用加样器吸打混匀。备注:转染复合物可直接加入含血0清的细胞培养基中进行转染。在极0少情况下会出现贴壁细胞脱落现象,可先从待转染细胞孔中吸取 500μl 培养基与转染复合物预混后再加入细胞中。若在细胞瓶中进行转染,直接加入到无细胞贴壁的对面或侧面并摇匀即可。
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