降温保存,即玻璃化方法就是用高浓度的冷冻稀释液,以极快的速率降温,使溶液内没有足够的时间形成冰晶核就直接转变成无形态的玻璃样固体的过程。此方法的优点是不用的程序控制降温仪,操作简便、,减轻损伤,但是由于在降温过程中需要加入大量的冷冻保护剂,高达40-60%v/v,这些冷冻保护剂往往存在一定毒性会内部细胞,同时由于玻璃化过程中为了确保整个生物样品的内部和外部均能实现降温,
细胞程序降温仪
降温保存,即玻璃化方法就是用高浓度的冷冻稀释液,以极快的速率降温,使溶液内没有足够的时间形成冰晶核就直接转变成无形态的玻璃样固体的过程。此方法的优点是不用的程序控制降温仪,操作简便、,减轻损伤,但是由于在降温过程中需要加入大量的冷冻保护剂,高达40-60%v/v,这些冷冻保护剂往往存在一定毒性会内部细胞,同时由于玻璃化过程中为了确保整个生物样品的内部和外部均能实现降温,需要减少样品的尺寸、以及增加和外界超低温环境(比如液氮)的接触面积。因此这种暂时只适用于小尺寸、小计量生物样品的保存,仅有ul单位。所以,目前大家还是通常采取慢速降温进行低温保存。
程序降温仪使用方便的人机界面,触摸屏实时显示箱内温度,样品温度,工作状态,提示出错信息。 预设6种冷冻程序,用户可在其基础上依据实验需要自主编程。可存10组用户的程序。 可外连打印机。 程序降温仪双温控探头,一个探测箱内温度,另一个放入样品内直接探测样品温度,这样所测温度更接近实际温度,显示器可显示箱内温度及样品温度。
程序降温仪的产品特性如下: 1、冷却速率和温度的控制,重现性好 2、使用方便简单,样品可原位成核 3、可实现线性和非线性降温方案 4、运转费用低:约为液氮冷冻仪的1% 5、在麦管应用中,在循环末温度可恒定在-100 ℃,直到关闭冷冻仪 6、不间断电源(UPS):电源失效时仍可完成温度循环 CBS程序降温仪液氮不能进气的原因分析: 主机部分故障;控制电路、电磁阀故障;管路堵塞。
细胞冷冻保存,1. 材料:生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO (Sigma D-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、0. 4%(w/v)trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、细胞冻存程序仪(也称为程序降温仪。冷冻保存方法:(1)传统方法: 冷存管置于4 ℃10分钟--->-20 ℃30分钟--->-80 ℃ 16~18小时(或隔夜)--->液氮槽vaporphase长期储存。-20 ℃不可超过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量,亦可跳过此步骤直接放入-80 ℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。(2)程序降温:利用已设定程序的等速细胞冻存程序仪以-1~-3 ℃/分钟之速度由室温降至(-80 ℃以下)-120 ℃,再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
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