加酶标：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以
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加酶标：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
常用的是40孔聚凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。（2） 包被（或抗原）的选择：将（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。
进口分装：检测范围和灵敏度不同，用量少时，可使用分装，前期是它的长久性不是很好。试剂盒的标准曲线点OD 值均在2.0±0.2，零孔的OD 值都控制在0.10以下。试剂盒的标准曲线相关系数R≥0.98。试剂盒重复性好，板内、板间变异系数均<9 %。试剂的组份都多给20%的富余量，确保完成48/96孔的检测，避免分次检测可能造成试剂量不足的情况。
洗板方法手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
实验结果计算以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。
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