武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷,由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色,依托光谷生物城技术产业优势,面向提供的生物技术服务。目的探讨荧光原位杂交技术(fluorescenceinsftuhybridization,FISH)在复杂染色体异常产前诊
植物原位杂交测试服务
武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷,由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色,依托光谷生物城技术产业优势,面向提供的生物技术服务。目的探讨荧光原位杂交技术(fluorescenceinsftuhybridization,FISH)在复杂染色体异常产前诊断中的应用价值。
基因组原位杂交技术是以亲本之一的总基因组DNA做探针,另一亲本的基因组DNA做封阻,在荧光原位杂交的基础上发展起来的一种染色体/染色质检测技术。做基因染色体定位或染色体杂交分析,基因组原位杂交时(检测是否有外源染色体或染色体片段),动物细胞需要制备分裂间期,中期的细胞。而植物样品则需要制备染色体制片。基因组原位杂交的原理与荧光原位杂交相同,不同的是所用的探针。基因组原位杂交是以来源不同的亲本之一的总基因组DNA 做探针,通过生物素,,荧光素等标记物标记后,再原位杂交到染色体制片上,接着通过与该标记物耦合的荧光素反应(标记物为荧光素则不需此步),检测该亲本染色体或染色体片段在中的存在状况;而其它亲本的基因组总DNA (或非探针的其它 DNA)以一定的浓度比例来封闭染色体上探针的非特异结合位点,尽可能使染色体上的特异位点暴露出来供探针杂交。
原位杂交的应用
①细胞特异性mRNA 转录的定位,可于基因图谱,基因表达和基因组进化的研究。
②感1染组织中病毒DNA/RNA 的检测和定位,如EB 病毒mRNA、类乳1头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA 的检测。
③癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录平的表达及其变化的检测。
④基因在染体上的定位。
⑤检测染体的变化,如染体数量异常和染体易位等。
⑥分裂间期细胞遗传学的研究,如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定,某些肿1瘤的诊断和物学剂量测定等。
武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷,由3位归国博士创办。酵母双杂交系统可采用不同组织、、细胞类型和分化时期材料构建cDNA文库,能分析细胞浆、细胞核及膜结合蛋白等多种不同亚细胞部位及功能的蛋白。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色,依托光谷生物城技术产业优势,面向提供的生物技术服务。
封片后标本要尽快检测和观察。每一次荧光显微镜的观察都会淬灭一部分信号,因此一定要观察和采集图像。有条件的话,小编推荐大家尽量选用共聚焦显微镜采集图像,荧光显微镜备选。
石蜡切片的FISH要点
(1)组织固定,采用PH7.2的10%甲醛固定24h是比较适合的,PH很重要。较厚的组织块建议切开后再固定。这一点小编已经反复提过很多次了。良好的固定是所有病理实验的前提。
(2)对于石蜡切片来说,采用蛋白酶K作为消化液是更优的选择。消化条件20g/L蛋白酶K在50℃下消化20min。胃蛋白酶是极易失活的,失活了就没法充分消化,消化过度又会使细胞核变模糊。综合来看,小编更推荐蛋白酶K。
(3)石蜡切片的杂交温度一般都是37摄氏度。而杂交时间则需要摸索才能得到更佳时间。不过,一般的过夜孵育基本可以达到目的。
(4)FISH实验中非特异性着色是个难以避免的问题,我们能做的就是尽量减少背景。具体可作为的地方:充分严格漂洗、全程避免干片、探针浓度不宜太高、杂交温度要控制在37℃。
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