武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷,由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色,依托光谷生物城技术产业优势,面向提供的生物技术服务。
基因组原位杂交技术是以亲本之一的总基因组DNA做探针,另一亲本的基因组DNA做封阻,在荧光原位杂交的基础上发展起
植物茎原位杂交技术服务
武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷,由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色,依托光谷生物城技术产业优势,面向提供的生物技术服务。
基因组原位杂交技术是以亲本之一的总基因组DNA做探针,另一亲本的基因组DNA做封阻,在荧光原位杂交的基础上发展起来的一种染色体/染色质检测技术。做基因染色体定位或染色体杂交分析,基因组原位杂交时(检测是否有外源染色体或染色体片段),动物细胞需要制备分裂间期,中期的细胞。般检测手段是要看身体是否已经有癌细胞存在,而对于没有产生癌变但已经具有风险的细胞却无从得知。而植物样品则需要制备染色体制片。基因组原位杂交的原理与荧光原位杂交相同,不同的是所用的探针。基因组原位杂交是以来源不同的亲本之一的总基因组DNA 做探针,通过生物素,,荧光素等标记物标记后,再原位杂交到染色体制片上,接着通过与该标记物耦合的荧光素反应(标记物为荧光素则不需此步),检测该亲本染色体或染色体片段在中的存在状况;而其它亲本的基因组总DNA (或非探针的其它 DNA)以一定的浓度比例来封闭染色体上探针的非特异结合位点,尽可能使染色体上的特异位点暴露出来供探针杂交。
武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷,由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。样品固定是原位杂交中必不可少的步骤,从化学反应角度来看,固定剂的使用和选择对后续杂交的影响不会太大,因为核酸杂交的功能分子基团被安全地包裹在DNA双螺旋结构中,而交联剂的使用对RNA基本没有影响。现凭借自身技术特色,依托光谷生物城技术产业优势,面向提供的生物技术服务。
网上有很多关于FISH的实验步骤教程,但每个探针盒子的操作可能存在差异。懂了原理,才能以不变应万变。
FISH的大致步骤分为探针变性、标本变性、杂交、洗脱、杂交信号放大(适用于适用生物素标记的探针)、复染、封片、荧光显微镜观察FISH结果。
原位杂交在前。
(1)常规脱蜡入水。
(2)37℃蛋白酶K消化20min,37℃漂洗液充分洗去蛋白酶K。
(3)滴加探针,加盖玻片,避光、湿盒、37℃过夜孵育。
(4)如果试剂盒允许的话,将试剂盒中洗脱液水浴加温至37℃震荡洗脱多余的探针。
(5)加碱性磷酸酶标记的抗1体,37℃孵育半小时,洗去抗1体后显色。
免1疫组化在后。
(1)将显色后确认为阳性的切片充分漂洗。
(2)在PH为6.0的枸橼酸钠溶液中,微波至96℃左右,作用10min。
(3)滴加一抗,37℃湿盒孵育2h。
(4)充分漂洗切片,滴加二抗,室温下孵育40-50min。
(5)DAB显色后,采用PBS中止显色反应。
(6)不要复染核,不然就盖住原位杂交信号了。
(作者: 来源:)