目前商业化提供的一些cAMP检测试剂盒主要应用ELISA的方案,使用的是非亲和纯化的cAMP多克l隆抗l体,尽管具有灵敏性,这些多克l隆抗l体与ATP存在一定程度的交叉反应。基于ATP是cAMP生产的底物,很有必要找到一种能高特异性识别cAMP的抗l体。
纽斯特生物开发出了鼠单克l隆抗l体的cAMP ELISA 检测试剂盒。该单克l隆抗l体对cAMP的特
cGMP kit
目前商业化提供的一些cAMP检测试剂盒主要应用ELISA的方案,使用的是非亲和纯化的cAMP多克l隆抗l体,尽管具有灵敏性,这些多克l隆抗l体与ATP存在一定程度的交叉反应。基于ATP是cAMP生产的底物,很有必要找到一种能高特异性识别cAMP的抗l体。
纽斯特生物开发出了鼠单克l隆抗l体的cAMP ELISA 检测试剂盒。该单克l隆抗l体对cAMP的特异性比cAMP、ATP等类似的小分子高出108 倍以上。相较于其他的多克l隆抗l体cAMP试剂盒,纽斯特生物cAMP ELISA试剂盒能显著的提高其灵敏性和特异性,且能有效避免来自动物多克l隆抗l体的批次间差异, 因此可以提供长久有效地可重复性定量检测。
实验步骤
使用前将各种试剂取出放置30分钟,平衡至室温。所有标准品和样品必需设置平行对照实验。
加入试剂至样品中,立即漩涡震荡2秒混匀。
1. 依据实验键盘纸决定酶标条的使用量,将剩余的酶标条连同干燥剂一起放回密封塑料袋,密封,4℃保存。
2. 移取50μL中和液至各个微孔中,除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。
3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔和B0孔(0 pmol/mL cAMP标准品)。
4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。
5. 移取100μL样品至相应的孔。
6. 移取50μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔。7. 移取50μL 偶联酶至各孔中,除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。
8. 移取50μL 抗l体工作液至各孔中,除了TA(全活性)孔、Blank(空白)孔和NSB(非特异结合)孔。
9. 将酶标孔置于孔板振动器上,250~500rpm,室温孵育2小时。
10. 在吸水纸上拍干微孔内溶液,加洗涤液400μL每孔洗3次,每次需拍干。
11. 后一次洗涤,清空各微孔,在干净的无尘吸水纸上轻巧酶标板数次,以确保没有洗涤液残留。
12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。
13. 每孔200μL显色底物溶液,于室温静置5~30分钟。(显色底物A和B需在临用前15分钟内等体积混合,并避光放置。)
14. 每孔加入50μL终止液。终止后立即读数。
15. 清除酶标l仪Blank(空白)孔值,读取450nm处的光密度值,在570nm至590nm之间有修正。如果酶标l仪不能自动清除Blank(空白)孔值,那么手动扣除每个读数的Blank(空白)孔光密度值。

因此为筛选出腺苷酸环化酶的激l活剂或磷酸二酯酶的抑制l剂,需要一个高敏感度、特异性的、可重复的方案用于检测cGMP的含量。考虑到大分子的化合物可能存在较弱的影响,这一个初筛是有必要的。
目前商业化提供的一些cGMP检测试剂盒主要使用的是非亲和纯化的cGMP多克l隆抗l体。尽管据称有特异性,但这些多克l隆抗cGMP抗l体与cAMP和GTP呈现一定程度的交叉反应。且在大多数细胞类型中,cGMP含量cAMP 100倍。
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