ELISA试剂盒的测定原理
测定技术的基础在于抗原之间的特异结合反应,所以任何的诊断剂离不开好的原料,如抗原,酶等。以前用于测定的抗原通常为各种纯化抗原,而则为纯化抗原动物后获得的多和使用杂交瘤技术得到的,而抗原或的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来,随着分子生物学的发展,使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或及其酶结合物等测定试剂几成为现实的新一代试剂,
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ELISA试剂盒的测定原理
测定技术的基础在于抗原之间的特异结合反应,所以任何的诊断剂离不开好的原料,如抗原,酶等。以前用于测定的抗原通常为各种纯化抗原,而则为纯化抗原动物后获得的多和使用杂交瘤技术得到的,而抗原或的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来,随着分子生物学的发展,使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或及其酶结合物等测定试剂几成为现实的新一代试剂,各种新型使用的测定方法也不断出现。
ELISA试剂盒的应用领域
ELISA法是诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的病种等方面的诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于流行病学调查。本法不仅可以用来测定,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大,可概括四个方面:
1、酶染色各种细胞内成份的定位。
2、研究抗酶的合成。
3、显现微量的沉淀反应。
4、定量检测体液中抗原或成份。
Elisa试剂盒——Elisa实验常见问题及解决方案
重复性不佳,高CV值
1 样品不均一 加样前充分混匀样品,取样确保移液位置一致;
2 包被板表面遭到破坏 洗板加样时尽量小心,避免破坏板的包被表面
3 孔与孔之间的交叉污染 孵育后取下盖子小心操作,避免孔与孔的污染;封板膜不能重复使用
4 加样量不一致 样品稀释前应充分混匀,尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴
5 边缘效应(外周孔显色较中心孔深) 孵育时尽量100 rpm旋转混匀
6 微量加样不准确 保证微量加样的准确性和均一性
7 不正确的洗涤 洗液准确配制;充分洗涤,静置15秒,确定每一步的洗涤
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