Elisa试剂盒注意事项
Elisa试剂盒解冻与存放:-20℃取出后建议放入2~8℃冰箱中解冻约,每隔一段时间轻轻摇晃均匀,不可直接放入温度较高处解冻,避免因温度改变太大,造成蛋白质凝集而出现沉淀,其质量下降。若短期无法用完一瓶,建议无菌分装,再放回冷冻,避免反复冻融。4℃长时间保存后的变性脂蛋白及纤维蛋白,形成絮状物质变差。
Elisa试剂盒有哪些需要注意的
兽药残留ELISA试剂盒厂家
Elisa试剂盒注意事项
Elisa试剂盒解冻与存放:-20℃取出后建议放入2~8℃冰箱中解冻约,每隔一段时间轻轻摇晃均匀,不可直接放入温度较高处解冻,避免因温度改变太大,造成蛋白质凝集而出现沉淀,其质量下降。若短期无法用完一瓶,建议无菌分装,再放回冷冻,避免反复冻融。4℃长时间保存后的变性脂蛋白及纤维蛋白,形成絮状物质变差。
Elisa试剂盒有哪些需要注意的?
1. 跟着病况的进展或由其他因素影响,某些在机体内的含量发作大幅动摇,因此有必要对标本进行预处理。间接法测定中,标本恰当稀释还可下降非特异性反响。
2. 加样一般运用加液器,在ELISA试剂盒中一般有4次加样:加标本、加酶结合物、加底物和加间断液。加标本时有必要每份标本运用一支移液器吸嘴,避免交叉污染。加酶结合物、底物和间断液时则不需更换吸嘴。
3.在成批手艺检测中,还应留神操作时差的影响。加样及混匀时间的差异,使抗原反响和酶促反响时间不一致,对竞争法及定量检测影响很大,不留神可能会导致过错效果或定量不准。
Elisa试剂盒的操作注意事项
洗刷是ELISA试剂盒操作过程中决议实验胜败的一个关键步骤。目的是除掉未结合的反响物,间断抗原抗体反响,除掉标本中与反响无关的成分、游离的酶标物以及反响过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。
断定效果须运用Elisa试剂盒测读仪,比色法判读可选择单波长或双波长,根据反响液颜色的不同选用不同波长的滤光片,以空白孔校零测定反响孔的吸光度值。具有杰出的重复性。
Elisa试剂盒——Elisa实验常见问题及解决方案
显色淡,灵敏度偏低
1 试剂盒未充分平衡 试剂盒从2~8℃冰箱取出后打开盒盖,于室温平衡至少20分钟,确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)
2 样品不适合做ELISA检测 样品一般选择培养上清、血浆。其他样品形式可能不适合做ELISA检测或者需要优化检测的条件(例如稀释液的成分)
3 酶标板在贮存或洗后拍干时过分干燥 防止板过于干燥
4 包被遭到破坏 操作温和,移液枪不能碰到孔底
5 样本和孵育条件不合适 按照说明书条件,建议孵育过程中全程振荡孵育。
6 洗涤浸泡时间过长 按照说明书操作。勿人为增加浸泡时间;
7 偶联HRP试剂污染 弃去试剂,重新配置
8 错误的稀释偶联HRP试剂 弃去试剂,重新配置
9 TMB底物孵育时间过短,因非人为因素影响,需要优化孵育时间 确定合适的孵育时间:人为判定-高浓度的标准品出现深蓝色;S4-5有淡蓝色;机器判定620 nm波长下测定OD值达到0.6-0.65
10 样本浓度过高或存在基质效应 建议做不同稀释倍数,确认样本稀释倍数。
11 滤光片设置有问题或者波长选择不对 确认仪器设置及选择正确的波长检测。
12 酶标板不适合做ELISA 不能使用细胞培养板,建议使用ELISA高吸附力板子。
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