恒温扩增试剂盒常用酶原料
尿DNA糖基化酶尿DNA糖基化酶(UDG酶)又称尿-N-糖基化酶(UNG酶)，可水解含尿的单链和双链DNA释放出游离尿，而对RNA无活性，与dUTP搭配使用，可建立成PCR防污染体系。其原理如下：在PCR体系中将dTTP部分或全部替换为dUTP后，使得反应生成含有dU碱基的扩增产物，这些扩增产物不同于天然模板，在进入含有UDG酶的反应体系时
DNA型恒温扩增试剂盒公司
恒温扩增试剂盒常用酶原料
尿DNA糖基化酶尿DNA糖基化酶(UDG酶)又称尿-N-糖基化酶(UNG酶)，可水解含尿的单链和双链DNA释放出游离尿，而对RNA无活性，与dUTP搭配使用，可建立成PCR防污染体系。其原理如下：在PCR体系中将dTTP部分或全部替换为dUTP后，使得反应生成含有dU碱基的扩增产物，这些扩增产物不同于天然模板，在进入含有UDG酶的反应体系时，可被UDG酶识别并切割尿碱基与糖磷酸骨架间的N-糖基键，而经切割后的DNA链在碱性或高温条件下易于断裂降解，从而失去被当作模板再扩增的能力，因此可防止扩增子污染（如下图）。市面上的UDG酶主要有普通型和热敏型，其中热敏型UDG酶在室温条件下即可催化反应，50℃以上加热可使其灭活，防止其降解后续PCR形成的含dU扩增产物。虽然UDG/dUTP体系具有防污染功能，但在实际测试中还得兼顾PCR的效率和灵敏度。一方面需确保PCR扩增产物掺入足够量的尿碱基，从而可被UDG有效切割；另一方面也需要保证反应体系添加的dUTP不会明显影响PCR效率，因此dTTP和dUTP的佳比例需通过优化确定。
恒温扩增常用酶
恒温扩增的方法多种多样，其对应的酶体系也各有差别，且一般为多酶体系，在酶原料选择上相比PCR复杂，下面只列举一些主要的恒温扩增方法相关酶。
LAMP相关酶环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)所用酶主要为具有链置换功能的DNA聚合酶，详细原理可参考聊聊恒温扩增技术。常用酶为Bst DNA聚合酶，用于DNA链合成，同时具有链置换功能；若检测模板为RNA，则可加入逆转录酶配制成RT-LAMP反应体系。
恒温扩增试剂盒常用酶简介
RPA相关酶
重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase Polymerase Amplification, RPA)是一种多酶协作的反应体系，详细原理可参考充满想象力的恒温扩增技术:RPA、RCA、SDA、HDA。该体系反应酶包含三种：重组酶：可与引物结合形成复合体，定位至与引物同源的靶序列，促使引物与模板结合，同时帮助DNA解链，以便启动扩增；单链DNA结合蛋白：可与被置换出的DNA单链结合，稳定单链结构；DNA聚合酶：如Bsu DNA聚合酶，用于DNA链合成，同时具有链置换功能。对于RNA模板，需在反应中加入逆转录酶形成RT-RPA体系；若利用标记探针进行检测，还需加入核酸酶对探针序列进行切割，常用核酸酶有核酸内切酶 IV(Endonuclease IV, nfo)和核酸外切酶 III(Exonuclease III, exo)，或者可与CRISPS/Cas系统搭配使用。
恒温扩增试剂盒应在什么样的温度下应用？
规范的ERA扩增试剂盒通过配置可在37℃-42℃的温度范畴内实际操作。过高的温度会对反映管理体系造成不好的危害，由于酶会慢慢地丧失所有活性。针对RT试剂盒，大家提议用户在40℃下运作反映，由于逆转录酶在稍高温度下具备更高的活性。 立博泰业——很多年市场销售恒温扩增试剂盒，企业坚持不懈用户为造物主，想用户之所感，急用户之所急，以诚为本，注重信誉度，以商品求发展趋势，以谋发展，大家诚挚地热烈欢迎各位同仁协作共赢未来。
（作者： 来源：）
