先前的结果表明，双变体HLHS是提高对酸类似物（包括氧代丁酸）的底物亲和力的突变体。较小且极性较小的侧链代替两个组氨酸的存在允许扩大较大疏水供体底物的活性位点并保持催化机制完整。将这两个位置与Asp、Leu、Phe或 Leu上的突变连续组合。此外选择L位，它参与稳定 ThDP 的唑循环，并且还可以通过与比 Leu 更长的碳链残基相互作用来稳定脂肪族底物。创建了五个文库，HLHXDX（或 LX、
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先前的结果表明，双变体HLHS是提高对酸类似物（包括氧代丁酸）的底物亲和力的突变体。较小且极性较小的侧链代替两个组氨酸的存在允许扩大较大疏水供体底物的活性位点并保持催化机制完整。将这两个位置与Asp、Leu、Phe或 Leu上的突变连续组合。此外选择L位，它参与稳定 ThDP 的唑循环，并且还可以通过与比 Leu 更长的碳链残基相互作用来稳定脂肪族底物。创建了五个文库，HLHXDX（或 LX、或 FX 或 LX 或 LX）（表 ）。
与Gly相比，代替His的非极性Ala或Val残基（HLHALI 和 HLHVLI）具有较低的活性，因为它们具有较高的空间位阻，这阻碍了的非极性头部与 HL 的相互作用。与 Gly 相比，极性和或带电的Ser和Glu代替 H (HLHELI) 也导致较低的活性，这可以通过Ser的极性侧链和与D冲突的Glu的负电荷来解释，这种环境使的非极性头部朝向HL的位置不稳定。 规模制备具有脂肪族 α-羟基酮裂解活性的TKgst 突变体随后在乙醇醛存在下对和裂解反应进行了制备规模的研究。
在剧烈的条件下，产物a也未能产生二醇（eq. ）；并且在另一种对映体配体的条件下，也未发生该转化（eq. ）。两种催化剂对映体的手性袋与羟基酮似乎并不相容。当用NaBH还原a时，仅定量得到手性反式二醇；而将保护羟基后，在相同条件下用NaBH还原该酮仅得到顺式二醇（eq. ）。其合理的解释可能是形成硼酸酯后进行分子内氢迁移，这可能是硼酸酯发生酯交换的结果。 （图片来源：Chem. Sci.）
图(a) SSBC-+-酚、-酚+NaBH和SSBC-+-酚+NaBH存在形成的DMPO-H的EPR光谱；(b)SSBC-电极和裸电极的I-t曲线。为了进一步说明SSBC NaBH-酚体系中可能的反应过程，以DMPO为剂进行了EPR光谱分析，证明了H自由基的存在。如图(a)所示，-酚与SSBC-混合溶液中无信号。当加入NaBH后，检测到一个明显的由::的::三联体(aH=. G, an =. G)组成的信号，该信号被认为是DMPO-H加合物。
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