在进行研究前,确定应用的探针类型。不同探针类型的优劣势请见上文描述。DNA探针的制备包括了前期的DNA片段分离纯化(或cDNA的)和酶促探针标记,可选随机引物标记法和缺口平移法等。RNA探针的制备包括了转录载体和转录法探针标记。寡核苷酸探针的制备要求先获得合成的寡核苷酸片段,再进行末端标记或加尾法探针标记。但无论采用何种标记探针及标记方法,对探针标记效果需进行终的评估,并准确计算探
动物生化指标检测
在进行研究前,确定应用的探针类型。不同探针类型的优劣势请见上文描述。DNA探针的制备包括了前期的DNA片段分离纯化(或cDNA的)和酶促探针标记,可选随机引物标记法和缺口平移法等。RNA探针的制备包括了转录载体和转录法探针标记。寡核苷酸探针的制备要求先获得合成的寡核苷酸片段,再进行末端标记或加尾法探针标记。但无论采用何种标记探针及标记方法,对探针标记效果需进行终的评估,并准确计算探针浓度。

原位杂交过程
杂交前可进行预杂交,以防止较高的背景染色。预杂交条件与杂交条件相同,只是预杂交液中不含探针和硫酸葡聚糖。
靶DNA的变性(对mRNA的原位杂交无需此步)
样品DNA的变性在DNA-DNA杂交检测中是必须的步骤,但同时可能会造成样品形态学的部分破坏,此步是实验中需要优化的一个步骤。常用的变性方法为碱变性和热变性,实验时可以摸索变性时间、变性温度等参数以获得佳条件。
如使用热变性方法,可在杂交时将探针的变性和样品DNA变性同步进行:将样品和探针溶液加盖盖玻片,置于烘箱80℃变性,染色体DNA样品处理2min,后冷却至37℃进行杂交。组织样品DNA的变性时间可增加至80℃10min。
肝纤维化动物模型造模方法:
1.法:
性肝纤维化产生的机理是Ⅲ型反应引起,白蛋白和的大分子物质,作为异种抗原进入大鼠体内后,刺激其产生相应的,当抗原再次进人机体后抗原结合,形成抗原—复合物(IC),抗原的反复、长期刺激,过量的复合物来不及被清除,沉积于的血管壁内外,引起血管炎,造成肝损伤。反复导致肝细胞变性、坏死,再生,纤维等变化,后发展为肝纤维化、。
动物选用雄性Wistar大鼠,体重130g左右。取猪0.5ml,腹腔内注射,每周2次,共8次(猪的制备:取新鲜猪血,离心制,滤过,分装放低温冰箱备用)。
评价:
大鼠第3周出现肝细胞变性、坏死,第4周的胶原纤维形成纤维束,从静脉到门管区之间相互伸延,发生纤维化。

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