恒温扩增常用酶
恒温扩增的方法多种多样,其对应的酶体系也各有差别,且一般为多酶体系,在酶原料选择上相比PCR复杂,下面只列举一些主要的恒温扩增方法相关酶。
LAMP相关酶环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)所用酶主要为具有链置换功能的DNA聚合酶,详细原理可参考聊聊恒温扩增技术。常用酶为Bst
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恒温扩增常用酶
恒温扩增的方法多种多样,其对应的酶体系也各有差别,且一般为多酶体系,在酶原料选择上相比PCR复杂,下面只列举一些主要的恒温扩增方法相关酶。
LAMP相关酶环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)所用酶主要为具有链置换功能的DNA聚合酶,详细原理可参考聊聊恒温扩增技术。常用酶为Bst DNA聚合酶,用于DNA链合成,同时具有链置换功能;若检测模板为RNA,则可加入逆转录酶配制成RT-LAMP反应体系。
恒温扩增试剂盒常用酶简介
RPA相关酶
重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase Polymerase Amplification, RPA)是一种多酶协作的反应体系,详细原理可参考充满想象力的恒温扩增技术:RPA、RCA、SDA、HDA。该体系反应酶包含三种:重组酶:可与引物结合形成复合体,定位至与引物同源的靶序列,促使引物与模板结合,同时帮助DNA解链,以便启动扩增;单链DNA结合蛋白:可与被置换出的DNA单链结合,稳定单链结构;DNA聚合酶:如Bsu DNA聚合酶,用于DNA链合成,同时具有链置换功能。对于RNA模板,需在反应中加入逆转录酶形成RT-RPA体系;若利用标记探针进行检测,还需加入核酸酶对探针序列进行切割,常用核酸酶有核酸内切酶 IV(Endonuclease IV, nfo)和核酸外切酶 III(Exonuclease III, exo),或者可与CRISPS/Cas系统搭配使用。
科普|恒温扩增试剂盒常用酶原料
NEAR相关酶
切口酶扩增反应(Nicking Enzyme Amplification Reaction, NEAR)是一种基于切刻内切酶切割特性的恒温扩增方法,详细原理可参考啥黑科技可10分钟完成核酸分子检测?。其使用的酶有两种:切刻内切酶:如Nt.BstNBI切刻内切酶,该类酶不同于常规限制性内切酶,其识别特定序列后仅在DNA其中一条链上切割形成缺口,并暴露出游离的3’端;DNA聚合酶:如Vent (exo-) DNA聚合酶或Bst DNA聚合酶,用于DNA链合成,同时具有链置换功能。
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