对于生长的组织培养液中的细胞,首先移除培养基,然后加入0.1M HCl处理细胞。孵育10分钟并观察细胞是否被裂解;如果裂解不充分,接着孵育10分钟并观察。以大于600g离心力于室温离心,收集上清直接用于实验。临用前在0.1M HCl中加入0.1%至1%浓度的Triton-x 100可增强细胞和组织裂解。在这个浓度范围内,去污剂并不干扰试验的结合部位,但
cGMP kit
对于生长的组织培养液中的细胞,首先移除培养基,然后加入0.1M HCl处理细胞。孵育10分钟并观察细胞是否被裂解;如果裂解不充分,接着孵育10分钟并观察。以大于600g离心力于室温离心,收集上清直接用于实验。临用前在0.1M HCl中加入0.1%至1%浓度的Triton-x 100可增强细胞和组织裂解。在这个浓度范围内,去污剂并不干扰试验的结合部位,但是会适度的增加光密度值。含有Triton的样品需利用标准曲线估计浓度,为了较精l确的测定,标准曲线需以相同方式稀释。取1 mL细胞培养上清加入10μL浓盐酸,600g离心力于室温离心,上清液直接用于实验测定分析。

进口分装:检测范围和灵敏度不同,用量少时,可使用分装,前期是它的长久性不是很好。试剂盒的标准曲线较高点OD 值均在2.0±0.2,零孔的OD 值都控制在0.10以下。试剂盒的标准曲线相关系数R≥0.98。试剂盒重复性好,板内、板间变异系数均<9 %。试剂的组份都多给20%的富余量,确保完成48/96孔的检测,避免分次检测可能造成试剂量不足的情况。检测抗l体及酶结合物的稀释度合适(均为1:30), 方便试验操作者准确地做稀释工作,保证实验结果的重复性。

洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
底物是光敏感的,要在临用前现配。
检测前,要打开酶l标仪,使之稳定10分钟以上。
底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。
待检样品要澄清,否则会影响结果。
温浴时间应遵守试剂盒规定。
应尽量做双孔实验,这样才能保证数据的准确性。
对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
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