低温生物的原理
保藏有多种方法,其原理大多大同小异,主要是运用一些方式尽量降低生物体内的代谢,达到延长生命,减少变异的目的。通常采用的方法为低温、缺氧、干燥。
低温主要对产生两方面的影响,首先,较低的温度可以减缓机体细胞的酶活,降低新陈代谢,达到保藏的目的。其次,低温同时会导致菌体诱发菌丝自溶机制,如果降温过程失误,同样会造成机体的机械损伤和溶质损伤。
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低温生物的原理
保藏有多种方法,其原理大多大同小异,主要是运用一些方式尽量降低生物体内的代谢,达到延长生命,减少变异的目的。通常采用的方法为低温、缺氧、干燥。
低温主要对产生两方面的影响,首先,较低的温度可以减缓机体细胞的酶活,降低新陈代谢,达到保藏的目的。其次,低温同时会导致菌体诱发菌丝自溶机制,如果降温过程失误,同样会造成机体的机械损伤和溶质损伤。
微生物具有容易变异的特性,因此,在保藏过程中,必须使微生物的代谢处于不活跃或相对静止的状态,才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。
低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素,所以,保藏方法虽多,但都是根据这三个因素而设计的。
低温生物的影响因素有哪些
菌的质量:保藏的应培养在营养丰富的条件下,使之进入稳定期,稍老一些的菌体对环境抵抗力强。另处,作为冷冻干燥的菌悬液细胞浓度要高不同的菌对冷冻干燥的耐受程度不同,如果保存的菌液细胞浓度不高,就会使以后传种造成困难,保存期也会受到影响。
保护剂:不同种类的保护剂对不同微生物的作用是不同的,如个别在脱脂乳作保护剂的情况下失败率高达99.99%,而采用葡聚糖等混和保护剂时失败率大大减少。一般情况下,那些容易保存的对保护剂的要求不很严格,而不易保存的对保护剂的要求却很苛刻。因此,选择好的保护剂是冷冻干燥保存的关键因素。
干燥速度:实验表明,慢速干燥比干燥存活率高,如青霉菌6h干燥存活率为67.3%,而3h为59%。
空气的影响:冷冻干燥后空气对细菌细胞影响较大,可导致细胞损伤进而失败,故在冻干后应立即在真空下融封,才有利于长期保存。
温度的影响:在干燥和真空状况下温度的影响远没有上述几项因素重要,因此可以在室温下保存,但许多微生物在4℃保存的存活率要比在室温下高1倍。
含水量的影响:水分含量过高对菌存活不利,完全脱水也不利于保存,一般把干燥后的细胞含水量控制在3%以下(1%-3%)
保藏的目的、原理及常用的方法有哪些?
保藏方法大致可分为以下几种:
1.传代培养保藏法
又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4—6℃冰箱内保存。
2.液体石蜡覆盖保藏法
是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起存活率,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。
3.载体保藏法
是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
4.寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。
5.冷冻保藏法
可分低温冰箱(-20—-30℃,-50—-80℃)、干冰酒精冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。
6.冷冻干燥保藏法
先使微生物在极低温度(-70℃左右)下冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。
低温生物的作用
从18年开始,就对北京顺义马坡工业区污水厂(日处理2000吨))进行微生物改良,经改良后,马坡污水厂各项出水指标均北京排放标准,一直平稳运行,被顺义环保局评为污水站。18年又连续对河北承德日处理5万吨的污水厂和辽宁长岭县日处理2万吨的污水厂进行微生物改良,都取得了非常好的改良效果,冬季低温氨氮指标一直持续稳定达标,平稳运行,没有二次再补充过耐低温生物。
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