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工业制备色谱
现代生物技术的迅速发展及其产业化对其下游过程,即生物技术产品(尤其是各种蛋白质)的分离纯化技术提出了迫切的需求。通过发酵和动、植物细胞培养等生成的目标产物需通过一系列的分离和纯化等步骤才能获得终的产品。通常,生物技术产品生产中分离提纯成本要占其生产总成本的40%~90%。在以小分子产品为主的传
高压制备色谱系统方法
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工业制备色谱
现代生物技术的迅速发展及其产业化对其下游过程,即生物技术产品(尤其是各种蛋白质)的分离纯化技术提出了迫切的需求。通过发酵和动、植物细胞培养等生成的目标产物需通过一系列的分离和纯化等步骤才能获得终的产品。通常,生物技术产品生产中分离提纯成本要占其生产总成本的40%~90%。在以小分子产品为主的传统发酵工业中分离成本要占总成本的60%左右,而以蛋白质为代表的现代基因工程产品则有时可高达90%左右。作为生物工程的一个组成部分,分离技术在其产品实现中起到重要作用。
蛋白质的特点使得其分离过程与传统化工分离过程有着极为不同的特点:(1)分离对象是具有特定的生物活性的生物大分子产品,分离过程设计中不恰当的物理和化学环境等(如温度、PH值、缓冲液选择、、搅拌和剪切力等)皆有可能引起其蛋白质分子结构发生改变,从而使之失活;(2)由于发酵液、细胞培养液或匀浆液中,我们所需要的目标产物往往存在于含有许多性质十分相似的杂质的稀溶液中,如何从这样一种复杂的稀溶液中经济有效地提取产物是生物分离技术面临的重大课题;(3)从卫生和安全角度出发,对于用基因工程产品,有着极高的纯度和同一性要求,对其中的有害杂质去除率要求极高,对分离设备材质和分离过程中引入的分离介质也有着严格的限制。
流速的分类
色谱中的流速通常有两种表述方式,一种是体积流速,即单位时间内流过某截面的流体的体积,单位mL/min,实际的分离过程中多用此来表示流体的速度;另一种就是线流速,即流体中任一质点在单位时间内沿管路方向所通过的距离,单位cm/min,该表示方式多用于理论分析。通常,在分离纯化过程中应采用佳流速以期得到好的分离效果。佳线流速从根本上是由填料粒径和形状所决定,而佳体积流速可由佳线流速与柱子内径的截面积相乘而得到。二者之间可通过色谱柱的内径互相换算。
离子交换色谱
离子交换色谱,用离子交换树脂作为固定相,主要用来分离带电离子的混合物。流动相中的组分离子与离子交换树脂(固定相)上的离子基团进行可逆交换,这种可交换的离子是阴离子或阳离子。
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