难点与关键点
将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键，也是难点。首先准确找到主动脉，这是此步骤的要点。可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净，用镊子轻轻夹住心 外膜（夹的越少越好，以免影响取材）将心脏向左上方提起，即可看清主动脉，又可使灌注针很容易地插入主动脉内。插入时动作要慢，针尖方向不要偏向右侧，以 免刺入右心房，如果感到有阻力，则将针退后、调整方向重新进针，直到
动物实验室
难点与关键点
将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键，也是难点。首先准确找到主动脉，这是此步骤的要点。可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净，用镊子轻轻夹住心 外膜（夹的越少越好，以免影响取材）将心脏向左上方提起，即可看清主动脉，又可使灌注针很容易地插入主动脉内。插入时动作要慢，针尖方向不要偏向右侧，以 免刺入右心房，如果感到有阻力，则将针退后、调整方向重新进针，直到进入主动脉，灌注针进入主动脉后可在心脏的上方看到其位置，灌注针进入主动脉的长度 好为 3~5 毫米，然后用丝线扎紧。切勿将灌注针放在左心室内，这样由于主动脉瓣的关闭，灌注液很难进入主动脉，而是沿着心室的切口流出，致使灌注失败。另 外，灌注针插入成功后，一定要用剪刀剪开右心耳而不是右心室，这是灌流液的出口。剪开心尖的位置一定要掌握好，不能偏右使灌注针插入右心室。
注意事项
1. 针头大小与动物的种类有关，t 同时针头一定要磨钝。
2. 检查灌注泵的运作情况，一定排出管子的气泡和空气，防止空气栓塞。
3. 经腹腔暴腔，先清楚升主动脉外面的脂肪组织和心外膜组织。
4. 将针头经左心室插入升主动脉（颜色变白的哦），并用钳子固定。
5. 解开右心耳，同时开启灌注泵。注意，不要随便揭开心脏的其他部位，否则有时候可能会灌注成功但是绝大部分会造成灌注不成功，尤其。
6. 将 4 度的生理盐水（好已动物的发白为标准，我们实验室的大鼠约用 250ml）和多聚甲醛 (根据所取得材料而定) 依次灌入。
7. 整个过程均应将动物放在冰上，以便于更好地保存目的蛋白和酶的活性。
动物睡眠剥夺模型,睡眠剥夺是研究睡眠的功能与发生机制的重要方法。睡眠剥夺模型的选择将直接影响睡眠剥夺实验的可靠性及准确性对睡眠剥夺实验结果具有重要的影响。现将几种常用的睡眠剥夺模型的方法评价及进展情况综述如下。
1.平台睡眠剥夺技术
此类方法主要是利用大鼠畏水及在水中无法进入睡眠的生活习性，通过在盛水的水槽中放置平台，让大鼠站立在平台上，因平台直径足够小(直径 6.5 cm 或更小)当大鼠进入 REM 时，因全身肌张力降低引起节律性低头触水以此来达到剥夺 REM 的目的， 此类方法简单易行无需复杂昂贵的设备，在不同条件的实验室均能开展因而应用广泛 其主要用来剥夺大鼠的REM ，可分为以下三种方法：
1.1单平台睡眠剥夺法
此方法早于 1964 年被应用在猫的睡眠剥夺实验中，不久以后有人将此方法应用于大鼠的睡眠剥夺实验，，方法为将一圆柱形台 (直径约 65 m m )放置在长 400 mm宽340 m m高160 mm的水槽中，往水槽中加水至平台露出水面约 10 mm ，将 1 只大鼠置于台上，大鼠可在平台上站立，可进入 NREM，当大鼠进入 REM 时全身骨骼肌张力明显降低，颈部肌张力降低引起节律性低头触水从而无法进入 REM，采用 SP 实验可引起动物的体重及胸腺重量减轻，上腺重量增加，血浆中上腺皮质酮增加，动物攻击行为增加，机体反应抑制等。
2强迫运动睡眠剥夺法
此类睡眠剥夺方法形式多样，在脑电监护情况下可行全部的睡眠剥夺和选择性的睡眠剥夺。其共同特点是通过动力装置迫使大鼠不停地运动，从而达到睡眠剥夺的目的。此类方法的优点是睡眠剥夺效果明显，睡眠剥夺的时间及强度易于掌握，重复性好，无须实验人员随时观察实验情况，减轻了实验人员工作强度。缺点是长时间运动引起机体的一系列应激反应可能干扰睡眠剥夺的实验结果，现选取其中两种有代表意义的方法介绍如下
2.1水平转盘睡眠剥夺法
此方法应用广泛，于 1983 年先应用在睡眠剥夺实验中，实验装置由一个电脑控制台、一个水平转盘及两个开放的长方形有机玻璃缸组成，转盘直径为 46 cm，在电脑控制下可以按顺时针逆时针方向随机水平转动! 两只有机玻璃缸的尺寸均为长60 cm ，宽20.5 cm，高 60 cm 。在距离缸底 5 cm 处的缸侧壁开有一条缝隙，使转盘的一半能分别从缝隙伸入两只玻璃缸中并能随意转动。缸底留置水约 2 cm 深，转盘离水面约3 cm 实验前1周将睡眠剥夺大鼠头颈部植入微电极' 并将微电极与电脑控制台相连，将大鼠放在转盘上适应环境1周，每天约1 h让大鼠习惯在转盘上活动，进水，进食等。实验时将实验组的大鼠及对照组的大鼠分别置于两只缸中的转盘上，当电脑通过微电极监测到实验组大鼠进入慢波或快波睡眠的脑电信号后，立即发出指令使转盘转动 6 s(6 s内转动 1/3 圈)，当大鼠被转到玻璃缸壁时，因被玻璃缸壁挡住而可能掉入水中，每次在实验组睡眠剥夺大鼠进入睡眠时转盘即转动 6 s，方向随机，转盘转动时两只大鼠均被动地随着转盘移动。此方法一次只剥夺一只大鼠睡眠，当实验组的睡眠剥夺大鼠在活动、进水、进食时转盘并不转动而此时对照组的大鼠则可趁机睡觉以弥补被剥夺的睡眠。此方法中睡眠剥夺组大鼠与对照组大鼠条件极其相似，因而可减少因实验条件不同而所致的应激反应。
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