原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交,从而对特定核酸顺序进行精0准确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。
原位杂交(in situ hybridization)将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交,称为原位杂交。
使用DNA或者RNA探针来检测与其互补的另一条链在细菌或其他真核细胞中的位置。
原
GISH
原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交,从而对特定核酸顺序进行精0准确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。
原位杂交(in situ hybridization)将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交,称为原位杂交。
使用DNA或者RNA探针来检测与其互补的另一条链在细菌或其他真核细胞中的位置。
原位杂交试验
收集斑马鱼的胚胎,在Holfretor水中培养,到达所需要的发育时期时,用蛋白酶去除卵膜,用4%多聚甲醛固定,在4℃保存,二十四小时后用50%甲6醇2%多聚甲醛溶液洗,然后换成甲9醇,在-20C 保存,待用(两天和两天以上的胚胎需要用双氧6水处理,去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培养,可阻断色素的形成)
杂交技术zui重要的因素之一是选择zui适的杂交反应温度。若反应温度Tm 10~15℃,碱基顺序高度同源的互补链可形成稳定的双链,错配对减少。若反应温度再低(Tm-30℃),虽然互补链之间也可形成稳定的双链,但互补碱基配对减少,错配对增多、氢键结合的更弱。如两个同源性在50%左右或更低些的DNA,调整杂交温度可使它们之间的杂交率变化10倍,因此在实验前必须首先确定杂交温度。通常有三种温度可供试验,即zui适复性温度、苛刻复性温度及非苛刻复性温度。温度的选择及温度对杂交的影响见表18-3。
zui适复性温度(Optimunm renaturation temperature, TOR):Tor =Tm –25℃
苛刻复性温度:Ts = Tm – (10或15℃)
非苛刻复性温度:Tns =Tm – (30或35℃)
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