现有的细胞培养基质胶的应用中会碰到哪些问题?
1)Matrigel(基质凝胶)很难处理, 只能在低温条件下溶解, 而且,不同批次间的产品在性能上、上会有不同,即使来自同一个厂家也不可避免;
2)相对来说,建立的微环境并不十分稳定, 较佳培养时间一般不会超过5天,且售价并不便宜;
3)重组层粘连蛋白和纤连蛋白仅适用于某些类型的细胞, 非常不稳定且昂贵;
4)聚
二维环境组织培养底物
现有的细胞培养基质胶的应用中会碰到哪些问题?
1)Matrigel(基质凝胶)很难处理, 只能在低温条件下溶解, 而且,不同批次间的产品在性能上、上会有不同,即使来自同一个厂家也不可避免;
2)相对来说,建立的微环境并不十分稳定, 较佳培养时间一般不会超过5天,且售价并不便宜;
3)重组层粘连蛋白和纤连蛋白仅适用于某些类型的细胞, 非常不稳定且昂贵;
4)聚鸟氨酸通常与层粘连蛋白结合使用, 主要限于神经元细胞。
细胞培养的基质胶(凝胶、基质凝胶)PhenoDrive和培养液是一回事吗?当然不是,基质胶(凝胶、基质凝胶)为参与生化反应的物质,可为化学元素、分子或化合物,经酶作用可形成产物。2可以对产品的多种参数进行控制,如孔隙度、形态、纤维直径以及特殊的受力能力等。例如,PD.( 新型合成细胞培养基质胶(凝胶、基质凝胶))培养基(液)(Medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。有的培养基还含有素和色素。
PHENODRIVE 作为一款人工合成的、非动物源性的新一代细胞、组织培养用基质胶(基质凝胶),与传统的自动物体提取的基质胶相比具有哪些优势呢?这里我们做一个简单、主要的总结如下:
传统基质胶
01 基本属于动物源性的产品;
02 可能含有非预期的、有害的外来污染物;
03 现有产品使用过程相对比较复杂;
04 存在生物化学和地形特征的批次间差异;
05 存储不稳定;
06 产品单一, 无法满足用户的需求;
07 重组层粘连蛋白和纤连蛋白仅适用于某些类型的细胞, 不稳定且昂贵;
08 部分产品只能在低温条件下溶解,且较佳培养时间较短;
09 聚鸟氨酸通常与层粘连蛋白结合使用,主要限于神经元细胞;
合成基质胶
01 合成的非动物源性的产品;
02 所有化学成分均可控;
03 使用非常方便, 水、乙醇、培养液等均可以溶解;
04 人工合成, 化学成分稳定, 批次间一致性较好;
05 性能稳定, 低温可存储至少12个月,紫外线照射不影响;
06 产品范围较广, 可满足几乎所有已知细胞系应用需求;
07 可用于无培养;
08 适用于 2D 表面培养耗材、微孔支架以及直接加入培养液;
09 能够模仿大多数组织的细胞外基质或上皮和内皮基底膜的网状结构;
10 能够以高度受控的方式向细胞展示生物配体,无论是在间距还是密度方面;
11 能够以受控和可的方式培养细胞并保留其表型而无需更改实验方案;
12 与现有的显微镜、成像技术以及常规的染色等应用方案兼容;
13 在旋转条件下悬浮形成3D细胞结构, 或与其他生物材料结合用于3D打印;
问:如何使用PHENODRIVE冻干粉末?
答:在乙醇或任何水介质中溶解, 将基质粉末稀释至0.01mg/mL至0.1mg/mL的浓度,在pH值7.4 的无菌缓冲溶液中, 或在75% 乙醇(用于涂布)中并过滤。
问:如何使用PHENODRIVE对96孔板或24孔板进行涂布?
答:使用移液管将重组液注入各孔(96孔50微升, 24孔200微升)并在无菌条件下通过溶剂蒸发进行实现涂层(建议紫外线照射环境)。通过设计不同的收集装置,可以获得单根纤维、纤维束、高度取向纤维或无规取向纤维膜等。蒸发时间将根据基质、浓度和/或体积而变化, 并在干燥后进行清洗。建议无接种细胞, 可在细胞粘附后(如播种后3小时左右)添加。
问:如何存储PHENODRIVE?
答:PHENODRIVE以冻干粉末形式进行销售,可方便地在水溶剂中进行重组。冻干粉末可在4°C下保存至少6个月, 重组的溶液可在 -20°C 下保存并在冷冻后3个月内使用。
问:如何使用PHENODRIVE对培养支架进行涂布?
答:应准备适当容量的移液管以确保足够量的重组溶液,所需的体积可根据支架的尺寸、孔隙率、化学成分和膨胀特性决定 (如使用乙醇, 支架可能会暂时膨胀, 同时应考虑与支架物理化学特性相关的因素)。
问:PHENODRIVE在悬浮细胞培养中如何使用?
答:通过对粉末重组的方式将PHENODRIVE溶解在对要培养的细胞类型具有特异性的无组织培养基中 , 将所得溶液与细胞悬液混合以达到0.001%至1%(v / v)的终浓度, 具有细胞悬液的典型混合物的变化范围为40,000个细胞/mL至1,000,000个细胞/mL, 并在温和的旋转条件下于室温或37°C孵育20分钟照常播种细胞。通过不同的制备方法,如改变喷头结构、控制实验条件等,可以获得实心、空心、核-壳结构的超细纤维或是蜘蛛网状结构的二维纤维膜。
问:1mg的PHENODRIVE 粉末可以涂布多少个微孔?
答:我们的标准包装是1mg/ 瓶, PHENODRIVE 粉末进行重组后, 其溶液可以涂抹1块96孔板或1块24孔板 。
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