亲和柱——亲和层析原理
亲和层析原理:利用生物分子之间的专一性识别性或特定的相互作用的分离技术称为亲和分离技术。在该技术中,亲和分离过程是通过引入亲和配基得以实现的。所谓亲和配基,是指具有对生物分子专一识别性或特异相互作用的物质。将亲和配基固定在不同的介质上,可得到不同的亲合分离技术,如固定在层析介质上,达到专一性层析分离的技术称为亲和层析技术。将亲和配基接在分离膜上,得
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亲和柱——亲和层析原理
亲和层析原理:利用生物分子之间的专一性识别性或特定的相互作用的分离技术称为亲和分离技术。在该技术中,亲和分离过程是通过引入亲和配基得以实现的。所谓亲和配基,是指具有对生物分子专一识别性或特异相互作用的物质。将亲和配基固定在不同的介质上,可得到不同的亲合分离技术,如固定在层析介质上,达到专一性层析分离的技术称为亲和层析技术。将亲和配基接在分离膜上,得到亲和膜分离技术。
亲和柱亲和层析的基本原理
亲和层析是一种吸附层析,抗原(或)和相应的(或抗原)发生特异性结合,而这种结合在一定的条件下又是可逆的。
所以将抗原(或)固相化后,就可以使存在液相中的相应(或抗原)选择性地结合在固相载体上,借以与液相中的其他蛋白质分开,达到分离提纯的目的。此法具有有效、、简便等优点。
亲和柱亲和层析过程中需要注意哪些?
由于亲和吸附达到平衡比较慢,所以特异性洗脱往往需要较常的时间和较大的洗脱条件,可以通过适当的改变其它条件,如选择亲和力强的物质洗脱、加大洗脱液浓度等等,来缩小洗脱时间和洗脱体积。
非特异性洗脱选择洗脱液的pH、离子强度时应注意尽量不影响待分离物质的活性,而且洗脱后应注意中和酸碱,透析去除离子,以免待分离物质丧失活性。
亲和柱——亲和层析的应用
抗原和利用抗原、之间高特异的亲和力而进行分离的方法又称为亲和层析。例如将抗原结合于亲和层析基质上,就可以从中分离其对应的。在蛋白质工程菌发酵液中所需蛋白质的浓度通常较低,用离子交换、凝胶过滤等方法都难于进行分离,而亲和层析则是一种非常有效的方法。将所需蛋白质作为抗原,经动物后制备,将与适当基质偶联形成亲和吸附剂,就可以对发酵液中的所需蛋白质进行分离纯化。抗原、间亲和力一般比较强,其解离常数为108-1012M,所以洗脱时是比较困难的,通常需要较强烈的洗脱条件。可以采取适当的方法如改变抗原、种类或使用类似物等来降低二者的亲和力,以便于洗脱。
另外金黄色球菌蛋白A(ProteinA)能够与球蛋白G(IgG)结合,可以用于分离各种IgG。
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