先前研究表明,用作供体底物的酮糖可以被酮酸羟基酸(HPA) 取代,通过释放二氧化碳使反应不可逆。因此,TK似乎是一种强大的酶,用于不对称合成α-羟基酮(方案)。当HPA作为供体时,TK对非磷酸化短碳链α-羟基醛(C–C)表现出活性。此外,TK优先接受(R)-羟基醛,产生 (S, R)α-羟基酮。发现并表征了来自嗜热脂肪地芽孢 (TKgst)的个热稳定TK,在高温下表现出高稳定性和对异常反应条件
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先前研究表明,用作供体底物的酮糖可以被酮酸羟基酸(HPA) 取代,通过释放二氧化碳使反应不可逆。因此,TK似乎是一种强大的酶,用于不对称合成α-羟基酮(方案)。当HPA作为供体时,TK对非磷酸化短碳链α-羟基醛(C–C)表现出活性。此外,TK优先接受(R)-羟基醛,产生 (S, R)α-羟基酮。发现并表征了来自嗜热脂肪地芽孢 (TKgst)的个热稳定TK,在高温下表现出高稳定性和对异常反应条件的稳健性。使用合理的诱变方法将羟基化或非羟基化醛作为受体 (,) 和脂肪族 α-酮酸作为供体,提高和扩大了 TKgst 底物特异性及其对映体偏好,确认了工程化的TKgst,其能够促进了脂肪族受体和供体底物组合的脂肪族α-羟基酮 (C-C) 的合成。
先前的结果表明,双变体HLHS是提高对酸类似物(包括氧代丁酸)的底物亲和力的突变体。较小且极性较小的侧链代替两个组氨酸的存在允许扩大较大疏水供体底物的活性位点并保持催化机制完整。将这两个位置与Asp、Leu、Phe或 Leu上的突变连续组合。此外选择L位,它参与稳定 ThDP 的唑循环,并且还可以通过与比 Leu 更长的碳链残基相互作用来稳定脂肪族底物。创建了五个文库,HLHXDX(或 LX、或 FX 或 LX 或 LX)(表 )。
这种廉价、非挥发性和高反应性的共底物是通过反应混合物的原位蒸馏进一步分离脂肪醛"或 "的的候选物。反应在°C和pH .下使用纯化的WT和早先鉴定的突变体进行(表),通过 H NMR进行定期监测。通过跟踪和的消失和伴随产物和的出现,以证明的羟基乙酰基或 的酰基在乙醇醛上的转移(表)。 TKgst突变体FI较早在分析规模上被确定为候选者。
如-、-和,-表现出其适用性。该研究不仅为污水污泥的化提供了一条新途径,而且为进一步设计用于还原的碳基催化剂提供了新的思路。.背景介绍是一类、非可生物降解的有机污染物,常见于染整、、制药工业废水中,因此迫切希望找到一种方便有效去除的方法。催化加氢反应被认为是一种可行的方法,并且其产物氨基比毒性更小。
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