材料与方法
一、材料
AFP购自上海领潮公司。SP2/0骨0髓瘤细胞(中科院上海细胞库)。8~12周龄Balb/c小鼠(第四军0医大学实验动物中心)。SPF级。
二、方法
1.动物免0疫:将4只8~12周龄Balb/c小鼠随机分为两组,每组2只,分别命名为1号和2号(第yi组)、3号和4号(第二组)。第yi组按常规免0疫方法进行免0疫一…,第二组采用改良
铝佐剂
材料与方法
一、材料
AFP购自上海领潮公司。SP2/0骨0髓瘤细胞(中科院上海细胞库)。8~12周龄Balb/c小鼠(第四军0医大学实验动物中心)。SPF级。
二、方法
1.动物免0疫:将4只8~12周龄Balb/c小鼠随机分为两组,每组2只,分别命名为1号和2号(第yi组)、3号和4号(第二组)。第yi组按常规免0疫方法进行免0疫一…,第二组采用改良的免0疫方法进行免0疫。免0疫前静脉采集少量血液,析出血0清作为后续检测的阴性对照血0清。
第yi组:AFP50ug(50肚1)与等量福氏完全佐剂(Sigma,美国)混合,充分乳化后注入8~12周龄Balb/c小鼠腹腔,2周后用同量抗原加不完全福氏佐剂(Sigma,美国)腹腔注射,4周后用同量抗原加不完全福氏佐剂腹腔注射,融合前3 d作腹腔注射加强免0疫。
贮存:4℃保存,避光(有效期3年)
一、使用说明
本产品与抗原混合搅拌能很快形成油包水状态,佐剂:抗原在1:1-1:2情况下都能形成稳 定的乳液,1:2乳化较1:1粘稠些,鉴于注射时候的阻力zui好冬季1:1,夏季1:2乳化。1:2乳化 后滴水数周不散;经多品种抗原多种属动物测试免0疫效果极0好,由于乳化彻0底牢固,因此 跟 其他佐剂相比比较不容易出现免0疫耐受现象。
二、注意事项
仅用于抗0体制备和动物免0疫学相关研究,不得用于人类或当药品使用。
使用方法
1. 用生理盐水将抗原稀释到2倍zui终浓度(按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl用量配制)。备注:推荐使用的抗原用量为小鼠每针次10-20μg、家兔每针次20-50μg。
2. 用振荡器充分混匀佐剂,无菌条件下取出所需用量(按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl)与抗原按体积比1:1混合,并用振荡器剧烈振荡5-10min,直至静止放置10min水油相不分层。备注:与抗原混合前佐剂分层属正常现象,但必须充分混匀后才能取用。
3. 通过皮下或肌肉单点注射免0疫动物,小鼠每针次100μl,家兔每针次200μl。
(1)佐剂与抗原混合后应尽快注射,若放置时间较长出现水油相分层,则必须按上述步骤2重新振荡混匀;
(2)抽入针管前应摇匀,抽入针管后应尽快注射;
(3)尽量选择引流淋巴0结附近(如腋窝和腹0股0沟附近)的皮下或肌肉进行免0疫。
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