原位杂交技术可应用于什么方面
1.细胞特异性mRNA转录的定位 可用于基因图谱、基因表达和基因组进化的研究。
2.感6染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位,如EB病毒mRNA、人类乳3头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测。
3.癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测。
4.基因在染色体上的定位。
5.检
原位杂交
原位杂交技术可应用于什么方面
1.细胞特异性mRNA转录的定位 可用于基因图谱、基因表达和基因组进化的研究。
2.感6染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位,如EB病毒mRNA、人类乳3头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测。
3.癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测。
4.基因在染色体上的定位。
5.检测染色体的变化,如染色体数量异常和染色体易位等。
6.分裂间期细胞遗传学的研究,如遗传病的产前诊断和某些遗传
杂交液中的阳离子浓度通过静电排斥作用影响了杂交体之间的链稳定性,较高的盐浓度将增加杂交体的稳定性。大于0.4M的Na离子浓度,对Tm值、双链复性速率的影响不大,但随着Na离子浓度的降低,将显著影响Tm值和双链复性速率。
有2机溶2剂(甲酰胺)的作用是降低DNA-DNA和DNA-RNA等双链体的解链温度。通常DNA需要在0.1~0.2M Na+ 90~100℃的条件下变性,那么应用于原位杂交,样品必须在65~75℃的条件下进行长时间变性,这将导致样品形态学的破坏。50%甲酰胺的应用能将杂交温度降至30~45℃。
硫酸葡聚糖具有很强的水合性,高浓度的硫酸葡聚糖会使得核酸分子无法获得周边亲水环境,增加了探针浓度,加快杂交反应速率。
使用分支DNA信号扩增的RNA FISH
Invitrogen ViewRNA和PrimeFlow检测是使用分支DNA信号扩增 (bDNA) 来检测特异性信号的直接荧光RNA ISH方法。 使用独立但兼容的信号扩增系统让RNA靶标的多重复用成为可能。 荧光RNA原位杂交检测分为四个主要步骤:样本制备、靶标杂交、信号扩增以及检测。 该方法可实现更高的特异性,更低的背景值和更高的信噪比。
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