恒温扩增试剂盒常用酶原料有哪些？
逆转录酶逆转录酶又称反转录酶，是一种RNA介导的DNA聚合酶，其反应过程中体现出三种功能为：以RNA作为模板合成互补DNA链 (complementary DNA, cDNA)，形成RNA:cDNA杂交链；发挥RNase H活性，降解RNA:DNA杂交链中的RNA模板；以cDNA作为模板合成第二链DNA，形成双链DNA（如下图）。其中
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恒温扩增试剂盒常用酶原料有哪些？
逆转录酶逆转录酶又称反转录酶，是一种RNA介导的DNA聚合酶，其反应过程中体现出三种功能为：以RNA作为模板合成互补DNA链 (complementary DNA, cDNA)，形成RNA:cDNA杂交链；发挥RNase H活性，降解RNA:DNA杂交链中的RNA模板；以cDNA作为模板合成第二链DNA，形成双链DNA（如下图）。其中，RNaseH活性是逆转录酶的一个内在特性，可在合成过程中同时切割RNA:cDNA杂合链中的RNA模板，该特性可能降低逆转录效率，因此在实际应用中，常采用人工改造后的低或无RNase H活性的逆转录酶。常用的逆转录酶有AMV和M-MLV，AMV分离自禽类成髓细胞瘤病毒(Avian Myeloblastosis Virus, AMV)，M-MLV逆转录酶分离自莫洛尼氏鼠病毒(Moloney Murine Leukemia Virus, MMLV)，前者热稳定性优于后者，但AMV逆转录酶的RNaseH活性也更强，不利于长片段cDNA合成。市面上多使用经基因工程改造过的M-MLV逆转录酶，其热稳定性改进，可在50℃左右工作，同时RNase H活性进一步减弱，提高了其逆转录效率。
恒温扩增试剂盒有哪些常用酶
TMA相关酶
依赖转录介导扩增(Tranion mediated amplification, TMA)的扩增模板为RNA或单链DNA，检测的扩增产物为RNA，详细原理可参考转录介导的核酸扩增技术小结。该体系所用酶有两种：M-MLV逆转录酶：用于模板RNA逆转录成DNA，并在逆转录过程中通过引物引入转录启动子序列，用于后续转录过程；T7 RNA聚合酶：以逆转录形成的DNA为模板，转录合成检测产物RNA。
恒温扩增试剂盒设计及储存
荧光探针设计:
在上下游引物中间,设计- -段长度为46-52nt与目的片段互补的序列作为荧光探针;
探针序列不与特异性引物识别位点重叠,长度为46-52 nt ,序列避免回文序列、内部二级结构和连续的重复碱基。
试剂盒储存:
运输条件:低温运输;
储存条件:储存温度≤-20°C ,避光保存,避免重压、反复冻融:
产品有效期: 12个月。
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