Elisa试剂盒——Elisa实验常见问题及解决方案
显色淡，灵敏度偏低
1 试剂盒未充分平衡 试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温（约25℃）
2 样品不适合做ELISA检测 样品一般选择培养上清、血浆。其他样品形式可能不适合做ELISA检测或者需要优化检测的条件（例如稀释液的成分）
3 酶标板在贮
玉米赤霉烯酮ELISA试剂盒厂家
Elisa试剂盒——Elisa实验常见问题及解决方案
显色淡，灵敏度偏低
1 试剂盒未充分平衡 试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温（约25℃）
2 样品不适合做ELISA检测 样品一般选择培养上清、血浆。其他样品形式可能不适合做ELISA检测或者需要优化检测的条件（例如稀释液的成分）
3 酶标板在贮存或洗后拍干时过分干燥 防止板过于干燥
4 包被遭到破坏 操作温和，移液枪不能碰到孔底
5 样本和孵育条件不合适 按照说明书条件，建议孵育过程中全程振荡孵育。
6 洗涤浸泡时间过长 按照说明书操作。勿人为增加浸泡时间；
7 偶联HRP试剂污染 弃去试剂，重新配置
8 错误的稀释偶联HRP试剂 弃去试剂，重新配置
9 TMB底物孵育时间过短，因非人为因素影响，需要优化孵育时间 确定合适的孵育时间：人为判定-高浓度的标准品出现深蓝色；S4-5有淡蓝色；机器判定620 nm波长下测定OD值达到0.6-0.65
10 样本浓度过高或存在基质效应 建议做不同稀释倍数，确认样本稀释倍数。
11 滤光片设置有问题或者波长选择不对 确认仪器设置及选择正确的波长检测。
12 酶标板不适合做ELISA 不能使用细胞培养板，建议使用ELISA高吸附力板子。
重复性不佳，高CV值
1 样品不均一 加样前充分混匀样品，取样确保移液位置一致；
2 包被板表面遭到破坏 洗板加样时尽量小心，避免破坏板的包被表面
3 孔与孔之间的交叉污染 孵育后取下盖子小心操作，避免孔与孔的污染；封板膜不能重复使用
4 加样量不一致 样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴
5 边缘效应（外周孔显色较中心孔深） 孵育时尽量100 rpm旋转混匀
6 微量加样不准确 保证微量加样的准确性和均一性
7 不正确的洗涤 洗液准确配制；充分洗涤，静置15秒，确定每一步的洗涤
样品或标准品OD超出正常范围
1 错误的样品或标准品的稀释 完全按照说明书稀释
2 偶联抗体浓度过高 按照说明书调整到的浓度
3 TMB底物孵育时间过长 调整到合适的孵育时间
4 样品或标准品污染 避免污染
5 错误的孵育时间或温度
（作者： 来源：）
