本试剂盒利用竞争酶联免l疫分析方法来测定细胞提取物或体外腺苷酸环化酶实验中的cAMP的水平。简而言之,将羊抗鼠多克l隆抗l体包被在酶标板上,细胞提取物或体外腺苷酸环化酶实验中的cAMP与固定数量的偶联辣根过氧化物酶的cAMP或碱性磷酸酶竞争性的结合抗cAMP单克l隆抗l体,已知的cAMP作为标准品来做标准曲线。经过一段时间孵育,洗掉所有试剂,加入底物进
Mouse cGMP kit
本试剂盒利用竞争酶联免l疫分析方法来测定细胞提取物或体外腺苷酸环化酶实验中的cAMP的水平。简而言之,将羊抗鼠多克l隆抗l体包被在酶标板上,细胞提取物或体外腺苷酸环化酶实验中的cAMP与固定数量的偶联辣根过氧化物酶的cAMP或碱性磷酸酶竞争性的结合抗cAMP单克l隆抗l体,已知的cAMP作为标准品来做标准曲线。经过一段时间孵育,洗掉所有试剂,加入底物进行显色。将多孔板置于酶标l仪上,于450nm或405nm波长下,进行读数。黄色的光强度与样品中cAMP的浓度呈反比关系。基于cAMP标准品所得曲线,通过测得的光密度可以计算出样品中cAMP的浓度。
对于生长的组织培养液中的细胞,首先移除培养基,然后加入0.1M HCl处理细胞。孵育10分钟并观察细胞是否被裂解;如果裂解不充分,接着孵育10分钟并观察。以大于600g离心力于室温离心,收集上清直接用于实验。临用前在0.1M HCl中加入0.1%至1%浓度的Triton-x 100可增强细胞和组织裂解。在这个浓度范围内,去污剂并不干扰试验的结合部位,但是会适度的增加光密度值。含有Triton的样品需利用标准曲线估计浓度,为了较精l确的测定,标准曲线需以相同方式稀释。取1 mL细胞培养上清加入10μL浓盐酸,600g离心力于室温离心,上清液直接用于实验测定分析。

包被抗l体(或抗原)的选择:将抗l体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的较适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值较大而蛋白量较少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
ELISA法是免l疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传l染病、寄生l虫病及非传l染病等方面的免l疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血l清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗l体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大,
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