保藏的目的、原理及常用的方法有哪些?
微生物具有容易变异的特性,因此,在保藏过程中,必须使微生物的代谢处于不活跃或相对静止的状态,才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。
低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素,所以,保藏方法虽多,但都是根据这三个因素而设计的。
保藏方法大致可分为以下几种:
1.传代培养保藏法
又有斜面
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保藏的目的、原理及常用的方法有哪些?
微生物具有容易变异的特性,因此,在保藏过程中,必须使微生物的代谢处于不活跃或相对静止的状态,才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。
低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素,所以,保藏方法虽多,但都是根据这三个因素而设计的。
保藏方法大致可分为以下几种:
1.传代培养保藏法
又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4—6℃冰箱内保存。
2.液体石蜡覆盖保藏法
是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起存活率,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。
3.载体保藏法
是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
4.寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。
5.冷冻保藏法
可分低温冰箱(-20—-30℃,-50—-80℃)、干冰酒精冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。
6.冷冻干燥保藏法
先使微生物在极低温度(-70℃左右)下冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。
低温生物的保存方法有哪些?
(一)培养基保存法
利用各种斜面和半固体培养基,加上石蜡油保存,是一种简易的保存方法。
1.普通琼脂斜面保存法:肠道菌、等一般细菌可接种于不含糖的普通琼脂斜面上,斜面底部应加少许无糖肉膏汤,以防干涸。经35℃培养18~24h后,移种于4℃冰箱中,一般可保存一个月,每月传代一次。
2.血液琼脂斜面保存法:链球菌、应接种于血液琼脂斜面上,35℃培养生长后,置4℃冰箱中保存,链球菌须半个月至1个月移种一次,新分离菌株须2~4天移种一次,以后逐渐延长移种时间,在适应后可延至半个月移种一次。
3.巧克力色斜面保存法:宜保存菌,并在35℃孵箱中保存,一般每2天移种一次。
4.鸡蛋斜面保存法:适于保存含有Vi抗原的沙门菌属及其他含表面抗原的细菌,一般可保存一个月。
5.半固体穿刺保存法:将细菌接种于琼脂半固体或琼脂半固体内,经35℃培养18~24h,再以无菌方法加入灭菌的液体石蜡。高度约lcm,置4℃冰箱保存。保存时间可达3~6个月。
(二)干燥保存法
原理是将细菌体内的水分蒸发掉,使其处于休眠和代谢停滞状态,从而达到长期保存的目的医|学教|育网搜集整理。干燥后低温保存,可保存数年至十几年。
(三)冷冻干燥保存法
本法又称冷冻真空干燥法。它综合利用了各种有利于保存的因素(低温、干燥和缺氧等),是目前有效的保存方法之一。用本法保存的具有成活率高,变异性小等优点,保存期一般3~5年,有的可长达10年以上。
(四)脱脂牛奶保存法
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低温生物的脱水存法
①沙土保存法,能产孢子的细菌、线菌及霉菌可采用此法保存,即将沙和土以3:2比例混合,经稀酸处理洗净过筛,装入小试管内,装置高度为1cm;灭菌2~3次,烘干后即可将在斜面培养基上生长良好的孢子,用无菌蒸馏水2~2.5ml制成孢子悬液,吸取少许加入沙土管中,经真空抽干,外观呈松散状态,于4℃冰箱保存,保存期可达5~7年。
② 冷冻干燥法,将孢子悬浮液与保护剂(一般用脱脂牛奶)相混合,放在安瓿管内于-20~-30℃的乙醇浴中速冻。然后,在低温下用真空泵抽干,并用干冰使水汽结冻,熔封安瓿管,于低温下保存。保存期
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