武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷,由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色,依托光谷生物城技术产业优势,面向提供的生物技术服务。
荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)是20世纪80年代末在性原
植物原位杂交技术服务
武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷,由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色,依托光谷生物城技术产业优势,面向提供的生物技术服务。

荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)是20世纪80年代末在性原位杂交技术基础上发展起来的一种非性分子生物学和细胞遗传学结合的新技术,是以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法。这些改造后的基因在启动子区有相同的转录因子结合位点,因此可以被相同的转录因子(如上述的Gal4蛋白)。荧光原位杂交技术技术原理是将荧光素直接或间接标记的核酸探针[或生物素、、dinit rophenyl(I)NP)、aminoacetylAAFfluorine(AAF)等标记的核酸探针与待测样本中的核酸序列按照碱基互补配对的原则进行杂交,经洗涤后直接在荧光显微镜下观察.
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双杂交系统的建立得力于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式转录因子的参与。80年代的工作表明, 转录因子在结构上是组件式的(modular), 即这些因子往往由两个或两个以上相互独立的结构域构成,其中有DNA结合结构域(DNA binding domain,简称为BD)和转录结构域(activation domain,简称为AD),它们是转录因子发挥功能所必需的。实验中,我们针对不同的植物及基因,都会根据经验尝试不同的实验条件。
原位杂交在前。
(1)常规脱蜡入水。
(2)37℃蛋白酶K消化20min,37℃漂洗液充分洗去蛋白酶K。
(3)滴加探针,加盖玻片,避光、湿盒、37℃过夜孵育。
(4)如果试剂盒允许的话,将试剂盒中洗脱液水浴加温至37℃震荡洗脱多余的探针。
(5)加碱性磷酸酶标记的抗1体,37℃孵育半小时,洗去抗1体后显色。
免1疫组化在后。
(1)将显色后确认为阳性的切片充分漂洗。
(2)在PH为6.0的枸橼酸钠溶液中,微波至96℃左右,作用10min。
(3)滴加一抗,37℃湿盒孵育2h。
(4)充分漂洗切片,滴加二抗,室温下孵育40-50min。
(5)DAB显色后,采用PBS中止显色反应。
(6)不要复染核,不然就盖住原位杂交信号了。
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