(1)75% (体积分数)酒精消毒孕鼠,在无菌条件下取出胎鼠,分离并切取脊髓,置于冷的无钙、镁的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。
(2)解剖显微镜无菌条件下仔细剥离脊膜及血管。
(3)用弹簧剪将脊髓剪成1cm3大小，消化液37℃消化15-20min，每五分钟振荡一次；
(4)去掉上清，加入终止液终止消化，吹打10-15次，不能有气泡，收集上清，剩余组织再消化
动物模型
(1)75% (体积分数)酒精消毒孕鼠,在无菌条件下取出胎鼠,分离并切取脊髓,置于冷的无钙、镁的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。
(2)解剖显微镜无菌条件下仔细剥离脊膜及血管。
(3)用弹簧剪将脊髓剪成1cm3大小，消化液37℃消化15-20min，每五分钟振荡一次；
(4)去掉上清，加入终止液终止消化，吹打10-15次，不能有气泡，收集上清，剩余组织再消化一次。
(5)4℃1000rpm离心10min，弃上清，加入种植液1重悬，培养箱内差速贴壁30min；
(6)收集上清，台盼蓝染色计数，按6*105cells/孔种入六孔板（种植液1），37℃，5%CO2，95%饱和湿度的培养箱中培养；
(7)培养第二天，全换液更换为种植液2；
(8)培养第四天，半量换液加入5uM的，24h全量换液；
(9)之后每周换液两次。
原位杂交过程
杂交前可进行预杂交，以防止较高的背景染色。预杂交条件与杂交条件相同，只是预杂交液中不含探针和硫酸葡聚糖。
靶DNA的变性（对mRNA的原位杂交无需此步）
样品DNA的变性在DNA-DNA杂交检测中是必须的步骤，但同时可能会造成样品形态学的部分破坏，此步是实验中需要优化的一个步骤。常用的变性方法为碱变性和热变性，实验时可以摸索变性时间、变性温度等参数以获得佳条件。
如使用热变性方法，可在杂交时将探针的变性和样品DNA变性同步进行：将样品和探针溶液加盖盖玻片，置于烘箱80℃变性，染色体DNA样品处理2min，后冷却至37℃进行杂交。组织样品DNA的变性时间可增加至80℃10min。
肝纤维化动物模型法：
180～200g Wistar或SD大鼠，皮射40%-50%CCl4，油溶液(0.3ml/100g)，每周2次，第2周 始，隔日以20％-30％酒精lml灌胃(或作为饮料)，饲以单纯玉米面(混以0.5％胆固醇)，共10周。
评价：第2周出现小叶中心小片状肝细胞变性坏死， 第4周开始有较薄的纤维间隔形成，第6周间隔进一步增厚，有假小叶形成：第8周形成厚的纤维间隔，分割形成假小叶。大鼠成活率60%-80%。
该模型是目前国内外常采用的动物模型，可靠且时间短，肝纤维化进展稳定，适合于过程的动态研究。
（作者： 来源：）
